动物肠道源抗铅益生乳酸菌的分离、鉴定及其缓解铅毒性的机理研究

声明

摘要

1 前言

1．1 重金属铅的概述

1．2 重金属铅的危害

1．2．1 对环境的影响

1．2．2 对机体的危害

1．3 治疗铅中毒的方法

1．3．1 螯合剂疗法

1．3．2 营养干预或膳食疗法

1．3．3 现有疗法的弊端

1．4 微生物吸附重金属的研究进展

1．5 乳酸菌抗重金属机制的研究进展

1．5．1 乳酸菌对重金属的吸附与去除

1．5．2 乳酸菌缓解机体的氧化应激

1．5．3 乳酸菌对机体肠道黏膜免疫的调节作用

1．5．4 乳酸菌的益生作用

1．6 研究目的和意义

2 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 试验试剂与菌种

2．1．2 试验动物

2．1．3 引物合成

2．1．4 试验仪器和设备

2．2 耐铅乳酸菌的分离和筛选

2．2．1 样品采集和耐铅乳酸菌的分离

2．2．2 耐铅乳酸菌的表型鉴定

2．2．3 耐铅乳酸菌的稳定性和耐受性

2．3 耐铅乳酸菌体外益生特性的测定

2．3．1 强酸耐受试验

2．3．2 耐胆盐试验

2．3．3 耐胰蛋白酶试验

2．3．4 抑菌试验

2．3．5 耐铅乳酸菌体外抗氧化试验

2．4 耐铅乳酸菌药敏试验

2．5 耐铅乳酸菌对铅的吸附试验

2．6 耐铅乳酸菌分子生物学鉴定

2．7 动物试验

2．7．1 小鼠醋酸铅半数致死量的确定

2．7．2 试验设计

2．8 样品采集

2．8．1 粪便样品采集

2．8．2 组织样品采集

2．9 样品处理

2．9．1 RNA处理

2．9．2 蛋白样品的处理

2．10 检测指标

2．10．1 体重变化监测

2．10．2 病理变化检测

2．10．3 铅含量检测

2．10．4 抗氧化指标检测

2．10．5 mRNA表达水平检测

2．10．6 P38 MAPK和NF-κB信号通路相关蛋白表达检测

2．11 数据分析

3 结果

3．1 耐铅乳酸菌的筛选结果

3．1．1 耐铅乳酸菌的表型特征

3．1．2 耐铅乳酸菌的铅耐受性与稳定性

3．2 耐铅乳酸菌益生性质测定结果

3．2．1 强酸耐受性质测定结果

3．2．2 胆盐耐受性质测定结果

3．2．3 胰蛋白酶耐受性质测定结果

3．2．4 抑制细菌能力测定结果

3．2．5 体外抗氧化试验结果

3．3 耐铅乳酸菌药敏试验结果

3．4 耐性乳酸菌对铅的吸附试验结果

3．5 分离菌株的分子生物学鉴定结果

3．6 动物试验结果

3．6．1 铅对小鼠半数致死量的测定结果

3．6．2 体重的检测结果

3．6．3 病理学观察结果

3．6．4 体内残留铅含量的检测结果

3．6．5 组织抗氧化功能检测结果

3．6．6 mRNA表达检测结果

3．6．7 P38 MAPK和NF-κB信号通路相关蛋白表达检测结果

4 讨论

4．1 课题设计思路

4．2 乳酸菌的益生特性

4．3 乳酸菌对机体的保护作用

4．3．1 乳酸菌缓解铅毒性导致的病理损伤

4．3．2 乳酸菌缓解铅毒性导致的氧化应激

4．3．3 乳酸菌缓解铅毒性导致的炎症反应

4．3．4 乳酸菌调节肠道粘膜屏障相关细胞因子表达

4．3．5 乳酸菌缓解铅毒性导致的炎症相关信号通路相关蛋白表达

4．4 展望

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文