奶牛泌乳性状相关基因启动子甲基化分析

声明

摘要

1 前言

1．1 DNA甲基化研究进展

1．1．1 DNA甲基化与CpG岛

1．1．2 DNA甲基化作用的分子机制

1．1．3 DNA去甲基化机制

1．1．4 甲基化生物学功能

1．1．5 DNA甲基化研究方法

1．2 DNA甲基化与泌乳研究现状

1．3 候选基因基因功能研究

1．4 研究目的与意义

2 材料和方法

2．1 奶牛乳腺组织泌乳性状相关基因甲基化启动子甲基化分析

2．1．1 实验主要试剂

2．1．2 实验主要仪器

2．1．3 实验动物

2．1．4 实验方法

2．1．5 实时荧光定量PCR检测泌乳性状相关基因mRNA水平

2．1．6 数据处理与统计分析

2．2 去甲基化药物5-Aza对乳腺上皮细胞Cyclin D1基因启动子甲基化的调节作用

2．2．1 乳腺上皮细胞原代及传代培养

2．2．2 5-Aza实验处理

2．2．3 数据统计处理与统计分析

3 结果与分析

3．1 奶牛乳腺组织泌乳相关基因启动子甲基化特征

3．1．1 STAT5a基因启动子CpG岛预测及其甲基化特征

3．1．2 ELF5基因启动子CpG岛预测及甲基化特征

3．1．3 AKT1启动子CpG岛预测及甲基化特征

3．1．4 mTOR启动子CpG岛预测及甲基化特征

3．1．5 EIF4EBP1启动子CpG岛预测甲基化特征

3．1．6 RPS6KB1启动子CpG岛预测及甲基化特征

3．1．7 SREBP1启动子甲基化特征

3．1．8 Cyclin D1基因启动子甲基化特征

3．2 实时荧光定量PCR分析不同奶牛乳腺组织泌乳相关基因mRNA差异结果

3．3 去甲基化5-Aza对乳腺上皮细胞Cyclin D1基因启动子甲基化的调节作用

3．3．1 乳腺上皮细胞的培养与鉴定

3．3．2 5-Aza对奶牛乳腺上皮细胞活性及增殖的影响

3．3．3 5-Aza对奶牛乳腺上皮细胞全基因组甲基化水平的影响

3．3．4 5-Aza对Cyclin D1基因启动子甲基化水平的影响

3．3．5 Cyclin D1的荧光定量结果

3．3．6 Cyclin D1蛋白的Western blotting实验结果

4 讨论

4．1 DNA甲基化与奶牛乳腺组织

4．2 营养条件、激素对奶牛乳腺组织泌乳相关基因启动子甲基化的影响

4．3 DNA甲基化与奶牛乳腺发育及乳品质

4．4 非5mCpG甲基化模式的乳腺泌乳生物学作用

4．5 实验方法的选择

5 结论

致谢

参考文献

附录A：缩略语表

攻读硕士学位期间发表的学术论文