克隆猪印迹基因表达及其甲基化状态研究

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CONTENTS英文目录

1 前言

1.1 基因印迹的研究进展

1.1.1 基因印迹的发现

1.1.2 印迹基因的基本特征

1.1.3 基因印迹的分子机制

1.1.4 基因印迹相关的疾病

1.2 猪的体细胞核移植的研究进展

1.2.1 体细胞核移植研究的现状

1.2.2 猪的体细胞核移植的效率

1.2.3 猪的体细胞核移植主要环节及影响因素

1.2.4 猪的体细胞核移植的应用价值

1.3 基因印迹与克隆动物发育

1.3.1 体细胞核移植过程中表观遗传学的变化

1.3.2 克隆动物发育异常与印迹的相关性

1.3.3 基因印迹在克隆动物中建立和维持的可能机制

1.4 本课题拟研究印迹基因的研究现状

1.4.1 IGF2基因

1.4.2 H19基因

1.4.3 PEG3基因

1.4.4 GRB10基因

1.4.5 IGF2和H19基因的印迹机制

1.5 本研究的目的和意义

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 主要仪器与设备

2.1.3 主要试剂及试剂盒

2.1.4 常用试剂及配制

2.1.5 主要的生物信息学网站及分析软件

2.2 实验方法

2.2.1 猪的体细胞核移植程序

2.2.2 Realtime RT-PCR

2.2.3 亚硫酸氢盐修饰后测序的甲基化分析方法

2.2.4 BrdU标记

2.2.5 囊胚内细胞团和滋养层的分离

2.2.6 RT-PCR

3 结果与分析

3.1 克隆猪印迹基因的表达

3.1.1 总RNA的提取

3.1.2 Realtime PCR反应的特异性

3.1.3 IGF2基因的表达

3.1.4 H19基因的表达

3.1.5 PEG3基因的表达

3.1.6 GRB10基因的表达

3.2 克隆猪印迹基因的甲基化

3.2.1 IGF2和H19基因DMR区的确定

3.2.2 亚硫酸氢盐修饰效率的确定

3.2.3 IGF2基因的甲基化

3.2.4 H19基因的甲基化

3.3 体细胞核移植胚胎印迹基因的甲基化变化

3.3.1 细胞培养过程中印迹基因的甲基化变化

3.3.2 核移植胚胎IGF2基因甲基化水平

3.3.3 核移植胚胎H19基因甲基化水平

3.3.4 核移植胚胎内细胞团和滋养层印迹基因甲基化水平

3.4 印迹基因的去甲基化与DNA复制的关系

4 讨论

4.1 印迹基因的研究方法

4.1.1 印迹基因表达的分析方法

4.1.2 印迹基因甲基化的分析方法

4.2 印迹基因在克隆猪中的表达

4.2.1 印迹基因在克隆猪个体中的表达

4.2.2 印迹基因在克隆猪胎盘中的表达

4.3 印迹基因在克隆猪中的甲基化

4.3.1 印迹基因在克隆猪个体中的甲基化

4.3.2 印迹基因在克隆猪胎盘中的甲基化

4.4 印迹基因在核移植胚胎中的甲基化

4.4.1 印迹基因在供核体细胞传代中的甲基化变化

4.4.2 印迹基因在核移植胚胎中的甲基化变化

4.4.3 内细胞团和滋养层的分离

4.4.4印迹基因在内细胞团和滋养层的甲基化状态

4.5 印迹基因的去甲基化与DNA复制的关系

5 结论

致 谢

参考文献

附录

攻读博士期间已发表的SCI论文