禽流感病毒抗体检测间接竞争ELISA方法的建立及初步应用

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声明

1引言

1.1禽流感的历史及危害

1.1.1禽流感的历史

1.1.2禽流感在我国的分布与危害

1.2禽流感的病原学特征

1.2.1禽流感的分类和命名

1.2.2禽流感病毒的形态结构

1.2.3禽流感病毒的理化特性

1.3禽流感的流行病学特征

1.4禽流感病毒的体液免疫

1.5禽流感病毒核蛋白和基质蛋白的研究概况

1.5.1核蛋白((NP)研究概况

1.5.2基质蛋白(M)研究概况

1.6禽流感检测方法研究进展

1.7禽流感的公共卫生意义

1.8本试验目的和意义

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1试验动物及血清

2.1.2检测用抗原

2.1.3主要溶剂及其配制方法

2.1.4仪器和设备

2.2试验方法

2.2.1 M1蛋白的表达及纯化

2.2.3兔抗M1蛋白家兔高免血清的制备

2.2.4以M1为抗原禽类A型AI间接竞争ELISA检测方法的建立

2.2.5 NP蛋白的表达纯化

2.2.6兔抗NP蛋白家兔高免血清的制备

2.2.7以NP为抗原禽类A型AI竞争ELISA检测方法的建立

3结果与分析

3.1 M1蛋白的表达及纯化

3.1.1诱导后菌液与纯化蛋白的SDS-PAGE分析

3.1.2 M1纯化蛋白的浓度测定

3.2兔抗M1蛋白家兔高免血清的制备

3.2.1兔抗M1血清效价的测定

3.2.2纯化蛋白与家兔阳性血清的western-blotting分析

3.3以M1为抗原禽类A型AI间接竞争ELISA检测方法的建立

3.4 NP蛋白的表达及纯化

3.4.1诱导后菌液与纯化蛋白的SDS-PAGE分析

3.4.2纯化蛋白的浓度测定

3.5兔抗NP高免血清的制备

3.5.1兔抗NP血清效价的测定

3.5.2纯化蛋白与家兔阳性血清的western-blotting分析

3.6以NP为抗原禽类A型AI间接竞争ELISA检测方法的建立

4讨论

4.1以NP、M1为抗原的间接竞争ELISAA型流感抗体检测的特点

4.2A型流感间接竞争ELISA检测方法的建立

4.2.1 M1和NP包被液的选择

4.2.2血清反应条件的优化

4.2.3竞争ELISA阳性临界值的判定

4.2.4关于异常的检测结果

4.2.5 ELISA试验操作注意点

4.3关于检测A型流感间接竞争ELISA方法

4.3.1竞争ELISA方法的优势

4.3.2本试验的后期工作中尚需完善的方面

5结论

致谢

参考文献

攻读硕士期间发表的学术论文