声明
第1章 引 言
1.1 流感嗜血杆菌简介
1.2 流感嗜血杆菌外膜蛋白
1.2.1 PD蛋白
1.2.2 PE蛋白
1.2.3 P2蛋白
1.2.4 P4蛋白
1.2.5 P5蛋白
1.2.6 P26蛋白
1.2.7 D15蛋白
1.2.8 Hap蛋白
1.2.9 P6蛋白
1.3 流感嗜血杆菌现有检测方法
1.4 单克隆抗体技术
1.4.1单克隆抗体的基本原理
1.4.2 细胞融合技术
1.4.3 单克隆抗体技术的应用
1.5 胶体金免疫层析试纸快速检测技术
1.5.1 胶体金免疫层析技术的简介
1.5.2 胶体金的定义和性质
1.5.3 基于双抗体夹心的胶体金层析技术的原理
1.6 研究主要内容
第2章 重组人流感嗜血杆菌P6-His融合蛋白的克隆表达及纯化
2.1 实验材料
2.1.1 菌种及质粒
2.1.2 酶与分子量标准
2.1.3 试剂盒与纯化相关材料
2.1.4 培养基及主要溶液
2.1.5 常见缩写全称
2.1.6 仪器与设备
2.2 实验方法
2.2.1 P6基因的合成
2.2.2 构建重组质粒pet-28a-P6
2.2.3重组质粒pET-28a-P6转化表达菌株E. coli Rosetta(DE3)
2.2.4 重组蛋白的诱导表达
2.2.5 重组蛋白的纯化
2.3 实验结果
2.3.1 目的基因的合成
2.3.2 鉴定重组质粒pET-28a-P6
2.3.3重组质粒pET-28a-P6转化表达菌株E. coli Rosetta(DE3)结果
2.3.4 重组蛋白P6-His的诱导表达结果
2.3.5 重组蛋白P6-His的纯化结果
2.4本章小结
第3章 流感嗜血杆菌P6-His融合蛋白单克隆抗体的制备
3.1 实验材料
3.1.1 抗原、细胞及实验动物
3.1.2 主要试剂
3.1.3 亲和层析柱
3.1.4 常用缩写
3.1.5 仪器与设备
3.2 实验方法
3.2.1 P6-His融合蛋白免疫小鼠
3.2.2 细胞融合
3.2.3 抗体检测
3.2.4 杂交瘤细胞的亚克隆
3.2.5 腹水的制备
3.3结果
3.3.1 融合前效价检测
3.3.2 阳性杂交瘤细胞的筛选
3.3.3 单克隆抗体的亚型鉴定
3.3.4 纯化腹水的浓度及纯度测定
3.3.5 单克隆抗体效价测定
3.4 本章小结
第4章 流感嗜血杆菌P6-His融合蛋白单克隆抗体的鉴定
4.1 实验材料
4.1.1 菌种、抗原、抗体
4.1.2 主要试剂及耗材
4.1.3 主要溶液
4.1.4 仪器与设备
4.2 实验方法
4.2.1 酶联免疫吸附法鉴定
4.2.2 Western Blotting鉴定
4.2.3生物膜干涉技术（BLI）测定
4.3实验结果
4.3.1 酶联免疫吸附法鉴定结果
4.3.2 Western Blotting鉴定结果
4.3.3 生物膜干涉技术（BLI）测定结果
4.4 本章小结
第5章 流感嗜血杆菌免疫层析试纸条的制备
5.1 实验材料
5.1.1 抗体及菌种
5.1.2 主要溶液
5.1.3 其他材料
5.1.4 仪器与设备
5.2 实验方法
5.2.1 器皿的清洗
5.2.2 胶体金溶液的制备
5.2.3 胶体金的质量鉴定
5.2.4 胶体金的标记
5.2.5 免疫层析试纸条的制备和组装
5.2.6 检测卡的测试程序和结果判定
5.2.7 检测卡的质量测试
5.2.8 试纸条的初步临床应用
5.3 实验结果
5.3.1 胶体金的制备结果
5.3.2 胶体金标记单克隆抗体的最适标记pH和最适标记量
5.3.3 胶体金标记单克隆抗体的质量检测
5.3.4 最佳抗体组合的选择
5.3.5 检测卡的特异性测试结果
5.3.6 检测卡的灵敏性测试结果
5.3.7 检测卡的稳定性测试结果
5.3.8初步临床应用检测结果
5.4 本章小结
第6章 总结与展望
6.1 研究结论
6.2 创新之处
6.3 研究展望
参考文献
致谢
湖北工业大学;
