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膜型肿瘤坏死因子-α向分泌型肿瘤坏死因子-α转换机制的初步探讨

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实验结果

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参考文献

综述膜型肿瘤坏死因子-α向分泌型肿瘤坏死因子-α转换机制的研究现状

附录基质金属蛋白酶(MMP)活性测定的改良底物胶电泳法

致谢

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摘要

为了研究TNF-α从前体向成熟型转换的机制和确定水解pro-TNF-α的酶的性质,我们首先建立了sTNF-α的细胞学检测方法及确定了采用的模型体系.通过该体系,选取了靶细胞和效应细胞的最佳培养或刺激时间.进一步研究中,我们用PAG-底物胶电泳检测了大鼠腹腔巨噬细胞,HL-60细胞和U937细胞MMPs的明胶水解活性和类型,结果提示在不同的细胞中水解pro-TNF-α的酶也不同.虽然用含明胶的PAG电泳未能在HL-60细胞检测到sTNF-α的分泌呈正相关变化的MMPs活性,但在HL-60细胞分泌的上清中我们还能初步检测到随LPS的刺激而改变的MMPs明胶水解活性.用TNF-α转换酶(TACE)反义寡核苷酸可抑制由LPS刺激引起的HL-60细胞sTNF-α的分泌,抑制效率达78.9﹪,采用流式细胞技术可观察到TACE反义寡核苷酸同时增加了HL-60细胞表面TNF-α的含量(荧光强度的增强),提示TACE反义寡核苷酸抑制了膜型TNF-α向分泌型TNF-α的转变,TACE可能在HL-60细胞的TNF-α转换中起重要作用.

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