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第1章前言
1.1无融合生殖现象及其研究进展
1.2本实验室的工作
1.3植物MADS-box基因的研究进展
1.3.1 MADS-box基因概述
1.3.2植物MADS-box蛋白的结构
1.3.3 MADS-box基因与花发育的关系
1.3.4 MADS-box基因调控花期及在花以外器官中的作用
1.4农杆菌介导的植物遗传转化
1.5蛋白质双向电泳技术
1.6本实验的内容及目的
1.7本实验的技术路线
第2章材料与方法
2.1实验材料
2.1.1植物材料
2.1.2菌株及质粒载体
2.1.3主要实验仪器及试剂
2.1.4 M14-341基因cDNA全长序列及引物
2.2实验方法
2.2.1 M14-341蛋白的同源性分析
2.2.2目的基因M14-341 cDNA全长的扩增
2.2.3琼脂糖凝胶电泳检测及胶的回收
2.2.4目的基因M14-341在野生型烟草及拟南芥中的扩增
2.2.5植物表达载体pBI-M14-341的构建
2.2.6转化大肠杆菌DH5α进行阳性克隆子筛选与鉴定
2.2.7电击法转化农杆菌EHA105菌株及阳性克隆子的筛选与鉴定
2.2.8叶盘法转化烟草
2.2.9花头浸泡法转化拟南芥
2.2.10转基因再生植株的分子生物学检测
2.2.11转基因再生植株的组织化学检测
2.2.12转基因再生植株的形态学观察及异常形态分析
2.2.13烟草转基因植株的蛋白质双向电泳
第3章结果与分析
3.1 M14-341蛋白的同源性分析
3.2目的基因M14-341 cDNA全长的扩增
3.3目的基因M14-341在野生型烟草及拟南芥中的扩增
3.4植物表达载体的构建
3.4.1质粒载体pBI121的制备
3.4.2质粒载体pBI121的酶切反应
3.4.3基因M14-341 cDNA全长的双酶切反应
3.5大肠杆菌DH5α阳性克隆子的筛选与鉴定
3.6植物表达载体pBI-M14-341导入根癌农杆菌
3.6.1根癌农杆菌EHA105阳性克隆子的筛选
3.6.2根癌农杆菌EHA105阳性克隆子的鉴定
3.7根癌农杆菌介导的模式植物的遗传转化
3.7.1烟草遗传转化体系的优化
3.7.2叶盘法转化烟草及花头浸泡法转化拟南芥
3.8转基因再生植株的分子生物学检测
3.8.1 M14-341在转基因再生烟草基因组DNA中的PCR检测
3.8.2 Southern印迹检测
3.8.3 M14-341在转基因再生烟草花、茎、叶中的RT-PCR检测
3.8.4 Northern印迹检测
3.9烟草转基因再生植株的组织化学检测
3.10拟南芥T0代转基因植株的分子检测
3.10.1 T0代拟南芥转基因植株基因组DNA的PCR检测
3.10.2 T0代拟南芥转基因植株的RT-PCR检测
3.11转基因烟草植株与对照植株差异表达蛋白的分析
3.12转基因再生植株的形态学观察及异常形态分析
3.12.1烟草转基因植株T0代
3.12.2拟南芥转基因植株T0代
第4章讨论
4.1 M14-341基因在转基因植株中的表达情况
4.2 M14-341基因对花发育的影响
4.3 M14-341基因对转基因植株花色的影响
4.4 M14-341基因对转基因植株果实与种子的影响
4.5 M14-341基因对转基因植株花期的影响
4.6少数转化植株中A类基因活性明显增高的原因分析
4.7转基因烟草植株与野生型植株差异表达蛋白分析
4.8本实验下一步的工作
结论
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
黑龙江大学;
