放疗对乳腺癌自我种植的影响及其在乳腺癌局部复发中的初步机制研究

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目的：在免疫缺陷小鼠中建立人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231原位移植瘤模型，观察放疗对乳腺癌自我种植的作用，通过探讨参与种植的肿瘤细胞特点和吸引肿瘤细胞自我种植的微环境变化，对自我种植和放疗的相互影响及机制进行初步探索。
　　方法：使用MDA-MB-231细胞，在NOD/SCID小鼠胸部第二对乳腺形成人乳腺癌原位移植瘤模型，左侧乳腺应用普通MDA-MB-231细胞形成“受体瘤”，而右侧乳腺应用转染了绿色荧光蛋白（GFP）的MDA-MB-231-GFP细胞形成“供体瘤”。BALB/C-nu小鼠则在接种“受体瘤”后不接种“供体瘤”，而通过尾静脉注射MDA-MB-231-GFP细胞。对“受体瘤”予以放疗，通过冰冻切片半定量分析荧光细胞的比例来确定转移率的高低；应用酶联免疫吸附试验（ELISA）确定照射前、照射后小鼠瘤体以及血液中IL-6、IL-8的变化水平，MDA-MB-231细胞放疗后培养基上清的IL-6、IL-8变化水平；Western blot比较受体瘤内HIF-1α以及VEGF水平的变化；免疫组化方法对比实验组以及对照组“受体瘤”体内CD68阳性的巨噬细胞以及LY6G阳性的中性粒细胞浸润水平的差异；原代培养提取并筛选“受体瘤”中的带GFP的荧光细胞为MDA-MB-231-GFP-S1，通过MTT方法比较其与母代细胞 MDA-MB-231-GFP在细胞增殖能力的异同， Transwell细胞迁移及侵袭实验比较S1代细胞与母代细胞的迁移及侵袭能力。
　　结果：⑴“受体瘤”接受放疗后，来源于“供体瘤”的种植肿瘤细胞比例明显升高，即放疗能诱导肿瘤细胞的自我种植；⑵放疗后MDA-MB-231细胞培养基上清中IL-6、IL-8无明显变化，而放疗后瘤体细胞匀浆中IL-6、IL-8实验组明显高于对照组；⑶实验组放疗后HIF-1α、VEGF表达水平明显较对照组高；⑷免疫组化显示放疗实验组CD68阳性巨噬细胞、LY6G阳性中性粒细胞明显高于对照组；⑸MDA-MB-231-GFP-S1细胞较母代MDA-MB-231细胞具有更加快速的细胞增殖率，迁移及侵袭能力。
　　结论：①放疗可使人三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞自我种植增强；②放疗后肿瘤微环境的变化可促使肿瘤来源的IL-6、IL-8分泌增多，吸引巨噬细胞及中性粒细胞聚集，从而可能吸引更多CTCs进行自我种植。③放疗可通过乏氧诱导因子HIF-1α途径促进VEGF分泌，增强肿瘤血管生成，这可能是CTCs的自我种植增强的原因；④形成自我种植的子代细胞较母代细胞具有更强的增殖及迁移侵袭能力；⑤乳腺癌细胞的自我种植可能是放疗后局部复发的原因之一。

著录项

作者
曹星;
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作者单位

华中科技大学;

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授予单位华中科技大学;
学科肿瘤学
授予学位硕士
导师姓名程晶;
年度 2017
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类乳腺肿瘤;放射疗法;
关键词
乳腺肿瘤; 放射疗法; 细胞迁移; 疗效分析;

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