慢病毒介导的靶向CTHRC1小干扰RNA对人黑素瘤细胞A375凋亡、增殖及迁移的影响

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目的：利用siRNA抑制黑素瘤细胞胶原三螺旋重复蛋白1（collagen triple helix repeat containing1,CTHRC1）基因的表达，探讨其对人黑素瘤细胞A375凋亡、增殖及迁移的影响及作用机制。
　　方法：构建siRNA慢病毒载体GV118-CTHRC1-RNAi转染至A375细胞中，实验分4组：空载体组（CON）、对照组(NC)、转染组1（KD1）及转染组2（KD2）。RT-PCR检测CTHRC1基因mRNA的表达情况，评估转染后CTHRC1基因mRNA的表达水平变化，选取KD1组进入后续实验；采用Annexin V-APC单染法流式细胞仪检测细胞凋亡率；利用CCK8试剂盒检测细胞增殖活性变化；Transwell小室检测细胞迁移能力；采用RT-PCR检测上皮间质转化相关因子（E-cad和N-cad）及细胞外基质降解相关因子（MMP-1、MMP-2、MMP-9及MMP-13）的在mRNA水平的表达情况。
　　结果：成功构建CTHRC1基因的慢病毒siRNA载体，感染黑素瘤细胞明显抑制CTHRC1的表达，敲减效率达到80％以上。NC组及KD1组在流式细胞仪检测凋亡率分别为：2.13±0.27及8.17±0.14（P＜0.05)；与第1天相比，在第4、5天细胞增殖倍数分别是(5.295±0.300，5.370±0.275)及(5.943±0.158，5.540±0.454)（P值均＜0.05)；迁移实验中转移率分别为0.981±0.317及0.912±0.206(P值均＞0.05)。相关分子检测中，MMP13敲减后表达量下降（P<0.05）；其他（E-cad、N-cad、MMP-1、MMP-2及MMP-9）无显著变化。
　　结论：重组CTHRC1-siRNA慢病毒可抑制A375细胞CTHRC1的表达水平，促进细胞凋亡，但对细胞增殖及迁移无明显影响。同时，MMP13表达下降，推测CTHRC1对黑素瘤的影响可能与细胞外基质降解有关。

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作者
王明;
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作者单位

华中科技大学;

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授予单位华中科技大学;
学科皮肤性病学
授予学位硕士
导师姓名黄长征;
年度 2014
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类皮肤肿瘤;肿瘤病理解剖学、组织学;
关键词
人黑素瘤细胞; 胶原三螺旋重复蛋白1; 基因表达; 慢病毒介导; 小核糖核酸干扰;

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