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生命早期变应原暴露对小鼠成年后免疫状态的影响

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第一部分不同模型方法变应性鼻炎小鼠血清特异性抗体及脾细胞培养上清细胞因子测定

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材料和方法

结 果

讨 论

第二部分新生小鼠早期变应原暴露对其成年后免疫状态的影响

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材料和方法

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参考文献

综述

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摘要

变应性疾病在全球范围内发病率为20%,近十年来有不断攀升趋势,而变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)作为最常见的变应性疾病之一,其发病机制尚未完全阐明。环境变应原暴露对其发病的作用备受关注,尤其在生命早期。目前研究认为,生命早期不同剂量变应原刺激对后期变应性鼻炎的发展有一定影响。本实验研究中,我们通过在生命早期给予不同剂量的变应原刺激,观察其对后期免疫功能状态的改变情况。从而为将来预防性变应原早期特异性免疫的应用奠定理论基础。
  第一部分:
  【目的】本部分旨在掌握相关免疫指标的ELISA检测方法,用AR模型检测此方法的灵敏度,为后续试验奠定基础;探索两种AR模型小鼠各自免疫特点。
  【方法】6周龄Balb/c雌性小鼠分为3组:AR模型组于第1、5、14、21天给予0.4mg/ml卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)生理盐水辅以佐剂Al(OH)3腹腔致敏,第22-35天连续14天鼻腔滴入25mg/mlOVA生理盐水进行激发;AR模型加强组于第1、5、14、17、21天给予Balb/c小鼠0.4mg/mlOVA生理盐水腹腔致敏,激发方法同模型组;对照组以生理盐水代替。三组均于末次激发后24h收集血清样本、脾脏单个核细胞培养72h后手机细胞上清样本,保存于-80℃。
  【结果】(1)血清抗体:模型组和模型加强组血清中OVA特异性IgE、IgG1、IgG2a均:显著升高,且模型加强组OVA特异性IgG1较模型组高。(2)脾细胞培养上清结果:模型组细胞上清中IL4有上升趋势,IFN-γ无变化,IFN-γ/IL4比值下降但比模型加强组水平高,IL10有上升趋势;模型加强组细胞上清中IL4明显升高且较模型组水平高,IFN-γ无变化,IFN-γ/IL4比值下降但比模型组水平低,IL-10显著升高。
  【结论】:模型组和模型加强组均造模成功;模型加强组追加一次腹腔注射后,ELISA方法仍能检测出免疫指标的微小差异,证实了此方法的可靠性和灵敏度,可用于后续试验;模型组Th2反应增强,模型加强组Th2功能增强的同时Treg细胞功能也得到加强,可为将来侧重Treg功能研究的模型提供参考。
  第二部分:
  【目的】本部分旨在观察生命早期变应原免疫接种对小鼠成年后免疫指标的影响。
  【方法】乳鼠出生后1天、8天、15天给予皮下注射,分为4组:小剂量组(10μgOVA+Al(OH)3),大剂量组(1000μgOVA+Al(OH)3),生理盐水组(NS组),生理盐水+Al(OH)3组(NS+AL组)。不同剂量(10μg和1000μg)变应原(卵清蛋白OVA)辅以佐剂Al(OH)3,5周龄时尾静脉注射100μgOVA进行激发,NS组和NS+AL组激发时均以生理盐水代替,一周后处死,收集血清样本、脾脏单个核细胞培养72h后收集上清样本,保存于-80℃。
  【结果】(1)血清抗体:大小剂量组血清中OVA特异性IgE、IgG1及IgG2a均较对照组(NS组与NS+AL组)显著升高,小剂量组OVA特异性IgE和IgG1较大剂量组高,大剂量组OVA特异IgG2a较小剂量组高;(2)脾细胞培养上清结果:大小剂量组细胞上清中IL4、IFN-γ及IL10均较对照组显著升高,而且小剂量组IL4、IFN-γ及IL10较大剂量组水平高,IFN-γ/IL4比值较大剂量组低。
  【结论】无论是小剂量或大剂量OVA刺激小鼠均使其Th1、Th2功能加强,但大剂量组小鼠以Th1反应增强为主。生命早期大剂量变应原刺激对将来小鼠变应性体质具有保护作用。

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