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中性粒细胞弹性蛋白酶NE对人肝癌细胞PI3K/Akt、MEK/ERK信号通路作用的研究

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目的:研究中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)对人肝癌HepG2细胞内PI3K/Akt、MEK/ERK信号通路的作用并探讨相关机制,同时观察NE对HepG2细胞增殖与凋亡的影响,为肝细胞肝癌发病机制的研究提供新的思路。
　　方法:激光共聚焦法观察NE在细胞内的定位;Western印迹杂交法检测NE作用后HepG2细胞内PI3K/Akt、MEK/ERK信号通路活化状态的变化并分析其相关性;设定不同浓度的NE作用于HepG2细胞,利用CCK-8法检测细胞的增殖情况;用流式细胞仪技术分析特定浓度NE作用后的细胞在受到化疗药物杀伤时细胞凋亡的变化;所得数据采用SPSS17.0软件进行统计分析。
　　结果:激光共聚焦实验表明NE可以进入细胞内,且主要位于细胞质靠胞膜侧;20nM和40nM的NE处理HepG2细胞后p-Akt的水平分别提高+45％和+74%(P<0.01),40nM组与20nM相比,p-Akt水平提高了20%(P<0.01),Akt、p-MAPK(Erk1/2)和MAPK(Erk1/2)无明显改变(P>0.05);CCK-8法检测不同浓度NE(20nM,40nM)作用细胞后的吸光度(OD值),结果发现经NE作用后的细胞吸光度明显增加;流式细胞仪检测HepG2细胞在经过15ug/ml丝裂霉素(MMC)处理后,凋亡率为39.7±2.3%,经过同样处理的NE(40nM)/HepG2细胞,凋亡率降至15.7±1.5%(P<0.01)。
　　结论:NE可以进入细胞并定位于胞膜侧,通过上调PI3K/Akt信号通路中Akt的磷酸化水平从而促进HepG2细胞增殖和逃避凋亡。

著录项

作者
夏天放;
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作者单位

华中科技大学;

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授予单位华中科技大学;
学科外科学(普外科)
授予学位硕士
导师姓名易继林;
年度 2012
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类肝肿瘤;
关键词
肝癌; 中性粒细胞弹性蛋白酶; HepG2细胞; MEK/ERK信号通路; PI3K/Akt信号通路; 发病机制; 磷酸化水平;

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