端粒酶逆转录酶负突变体对肿瘤细胞放化疗敏感性影响的实验研究

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目的:研究端粒酶逆转录酶负突变体对肿瘤MG63、MCF7细胞端粒酶活性的影响，探讨端粒酶逆转录酶负突变体对肿瘤细胞放化疗敏感性的影响。方法免疫荧光方法检测细胞hTERT表达；采用端粒重复序列扩增-酶联免疫测定法(TelomericRepeatAmplificationProtocalELISA，TRAP-ELISA)检测端粒酶活性的变化，流式荧光原位杂交(FlOW-FISH)检测细胞端粒长度；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞hTERT及凋亡相关基因mRNA表达；接种裸鼠检测细胞致瘤性；AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率；westernblot检测Bcl2、AIF蛋白质表达；共聚焦显微镜(confocalmicroscope)检测AIF在凋亡细胞的表达。结果免疫荧光显示hTERT蛋白高表达于肿瘤细胞MCF7、MG63细胞核，转染端粒酶逆转录酶负突变体(DN-hTERT)肿瘤细胞端粒酶活性下降，MCF7细胞转染DN-hTERT后细胞端粒酶活性为2.41±0.26与转染空载体组3.10±0.17比较有显著差异(P＜0.05)，MG63细胞转染DN-hTERT后细胞端粒酶活性为2.30±0.26与转染空载体组3.00±0.17比较有显著差异(P＜0.05).转染DN-hTERT后RT-PCR检测细胞hTERTmRNA表达增强，转染DN-hTERT的MCF7、MG63经60Co15Gy照射48小时或0.5μg/ml阿霉素作用48小时后，细胞凋亡相关基因P53，C-myc及BaxmRNA表达上升，Bcl2表达下降.FlOW-FISH检测到细胞端粒长度的荧光强度差值MG63细胞转染DN-hTERT为14.25±0.32，WT-hTERT为21.48±0.12，空载体I为19.36±0.50，三者差异有显著意义(P＜0.05)。转染DN-hTERT的MG63细胞裸鼠致瘤率为0，空载体I为30％，WT-hTERT为70％，差异有显著性(P＜0.01)。转染DN-hTERT后MCF7及MG63细胞经15Gy60Co照射24h或0.5ug/ml阿霉素作用48h后，AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡率较转染空载体组显著升高(P＜0.05)。westernblot检测到凋亡相关基因Bax及AIF表达增强，Bcl2表达减弱。confocal显示凋亡小体内有AIF的浓聚。结论:端粒酶逆转录酶负突变体能降低肿瘤细胞中端粒酶活性，抑制肿瘤细胞增殖活性和恶性表型，端粒酶逆转录酶负突变体能增强肿瘤细胞对放化疗的敏感性，增强放化疗对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。

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作者
饶耀剑;
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作者单位

华中科技大学;

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授予单位华中科技大学;
学科骨外科
授予学位博士
导师姓名夏仁云;
年度 2005
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类化学（药物）疗法;
关键词
端粒酶逆转录酶负突变体; 肿瘤细胞; 放化疗敏感性; 细胞凋亡; 端粒酶;

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