声明
摘要
缩略词表
1序言
1．1蓝藻的光合作用
1．1．1蓝藻
1．1．2藻胆体和光合作用
1．1．3藻胆蛋白
1．1．4胆色素的生物合成
1．2荧光蛋白的研究进展
1．2．1 GFP绿色荧光蛋白家族
1．2．2 DsRed橙红色荧光蛋白家族
1．2．3红外荧光探针
1．2．4荧光探针的应用
1．3激光共聚焦显微成像技术
1．4大斯托克位移荧光探针的研究
1．5本研究课题的目的和意义
2基于FRET原理的大斯托克位移荧光探针的研究
2．1引言
2．2材料与仪器
2．2．1主要材料
2．2．2主要试剂
2．2．3实验仪器
2．3实验方法
2．3．1 PCR扩增目的片段以及原核表达质粒的构建
2．3．2感受态细胞的制备
2．3．3阳性克隆子的筛选
2．3．4融合蛋白的表达、破碎与纯化
2．3．5融合蛋白的紫外可见光谱及荧光光谱测定
2．3．6 SDS-PAGE和锌电泳
2．3．7融合蛋白荧光寿命测定
2．3．8融合蛋白pH稳定性检测
2．3．9融合蛋白盐酸胍稳定性检测
2．3．10融合蛋白体外光稳定性的检测
2．3．11融合蛋白热稳定性检测
2．3．12融合蛋白在大肠杆菌中成熟速率测定
2．3．13荧光蛋白聚集态的分析
2．3．14动物细胞的培养与转染
2．3．15动物细胞表达质粒的构建
2．3．16荧光蛋白在细胞内亮度的比较
2．3．17高分辨率激光共聚焦扫描显微成像
2．4结果与分析
2．4．1荧光光谱分析
2．4．2融合蛋白荧光寿命分析
2．4．3融合蛋白pH稳定性研究
2．4．4融合蛋白耐盐酸胍和光稳定性的研究
2．4．5融合蛋白热稳定和成熟速率的研究
2．4．6融合蛋白聚集态的研究
2．4．7动物细胞HEK 293T中有效亮度的比较
2．4．8动物细胞HeLa中高分辨率成像
2．5本章小结
3基于ApcF2的荧光探针的进化研究
3．1引言
3．2材料与仪器
3．2．1主要材料
3．2．2主要试剂
3．2．3实验仪器
3．3实验方法
3．3．1诱变库的建立
3．3．2诱变库的筛选
3．3．3诱变库的表达以及光谱测定
3．3．4摩尔消光系数和荧光量子产率参数的计算
3．3．5诱变体序列测定
3．3．6诱变体序列比对
3．4实验结果
3．4．1提高阳性克隆率的分析
3．4．2 Qpix420筛选结果以及分析
3．4．3诱变体的光谱分析
3．4．4诱变体的序列分析
3．5本章小结
4不同方法萃取PEB／PCB色素
4．1引言
4．2材料与仪器
4．2．1主要材料
4．2．2主要试剂
4．2．3实验仪器
4．3实验方法
4．3．1细胞的表达和提纯
4．3．2蛋白的变性
4．3．3色素的萃取
4．4实验结果
4．4．1不同方法的萃取效果分析
4．5本章小结
参考文献
附录
致谢
