苏云金芽胞杆菌YBt-020晶胞粘连相关的蛋白互作网络的构建

声明

摘要

缩略语表

1 前言

1．1 苏云金芽胞杆菌简介

1．2 芽胞的结构与形成

1．2．1 芽胞的结构

1．2．2 芽胞的形成

1．3 芽胞外壁和芽胞衣

1．3．1 芽胞外壁的结构和主要成分

1．3．2 芽胞外壁的组装

1．3．3 芽胞外壁组装的重要蛋白

1．3．4 芽胞衣的结构与成分

1．3．5 芽胞衣的组装

1．3．6 芽胞外壁和芽胞衣蛋白间的相互作用与组装依赖关系

1．4 晶胞粘连简介

1．4．1 晶胞粘连的定义和发现

1．4．2 晶胞粘连机制的研究进展

1．5 本研究的目的与意义

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 菌株、质粒及引物

2．1．2 培养基及菌株培养条件

2．1．3 供试抗生素

2．1．4 缓冲液、试剂及其配方

2．1．5 酶、抗体和试剂盒等

2．1．6 实验仪器

2．2 实验方法

2．2．1 分子生物学基本操作方法

2．2．2 细菌双杂交实验方法

2．2．3 GST和His标签蛋白纯化

2．2．4 Ligand blot实验方法

2．2．5 GST-Pull Down实验方法

3 结果与分析

3．1 利用细菌双杂交技术建立YBT-020中与SCA表型相关的蛋白互作网络

3．1．1 细菌双杂交靶标文库的构建

3．1．2 筛选与Cry26Aa、ScaA和ScaB蛋白有相互作用的蛋白

3．1．3 细菌双杂交诱饵文库的构建

3．1．4 细菌双杂交诱饵文库在靶标文库中的筛选

3．1．5 YBT-020中与SCA表型相关的蛋白相互作用网络的构建

3．2 体外实验验证了Cry26Aa与ScaA、ScaB蛋白间的相互作用

3．2．1 蛋白样品的制备

3．2．2 Ligand blot实验结果

3．2．3 GST-Pull down实验结果

3．3 YBT-020中影响其SCA表型的关键蛋白的分析与验证

3．3．1 关键蛋白的分析与确定

3．3．2 关键蛋白对SCA表型影响的验证

4 讨论与总结

4．1 ScaA、ScaB蛋白决定粘连晶体定位的可能机制

4．2 寻找不同菌株SCA表型的粘连决定因子的新思路

4．3 蛋白互作网络为新的芽胞与晶体共发育模式的研究提供基础

参考文献

附录

致谢