声明
摘要
缩略语表
1 前言
1．1 课题的提出及研究的主要内容
1．2 STAY-GREEN基因的研究现状
1．3 滞绿突变体的研究与应用意义
1．4 Pst DC3000细菌与植物抗病性研究
1．5 Botrytis cinerea真菌与植物抗病性研究
1．6 叶片衰老
1．6．1 叶片衰老的特征
1．6．2 植物内源激素与叶片的衰老
1．6．3 病原菌与叶片的衰老
1．6．4 ROS与叶片的衰老
1．6．5 非生物逆境与叶片的衰老
1．6．6 矿质营养与叶片衰老
1．7 植物细胞死亡的调控
1．8 过敏性反应在植物抵御病害中的作用
2 材料与方法
2．1 植物材料
2．1．1 植物材料的栽培与管理
2．1．2 植物材料的PCR阳性检测
2．2 病原菌
2．2．1 Pst DC3000
2．2．2 Botrytis cinema
2．3 离体叶片的病菌接种
2．3．1 光照及黑暗条件下接种Pst DC3000
2．3．2 光照及黑暗条件下接种Botrytis cinerea孢子
2．4 过氧化氢的原位检测(DAB染色)
2．5 死亡细胞的原位检测(台盼蓝染色)
2．6 叶绿素含量的测定
2．7 ROS清除酶活性测定
2．7．1 酶粗提液的制备
2．7．2 SOD活性测定
2．7．3 POD活性测定
2．7．4 CAT活性测定
2．7．5 APX活性测定
2．8 相关基因的表达分析
2．8．1 离体叶片接种Pst DC3000后不同时间点取样
2．8．2 RNA的提取及反转录
2．8．3 HSR203J、PAO、ROS及PR相关基因的表达分析
2．9 乙烯释放量的测定
2．10 番茄果实的病菌接种
2．10．1 MG、BR番茄果实接种Pst DC3000
2．10．2 MG、BR番茄果实接种Botrytis cinerea孢子
3 结果与分析
3．1 SlSGR1组织表达分析
3．2 SlSGR1转基因超量及干涉植株的PCR阳性检测
3．3 光照及黑暗条件下离体叶片接种Pst DC3000实验
3．3．1 接种Pst DC3000 6d后出现的表型差异
3．3．2 接种Pst DC3000后转基因番茄衰老相关的生理生化分析
3．3．3 接种Pst DC3000后HR反应分析
3．3．4 干涉SlSGR1可提高叶片对Pst DC3000的抗性
3．4 光照及黑暗条件下离体叶片接种Botrytis cinerea实验
3．4．1 接种Botrytis cinerea 10d后出现的表型差异
3．4．2 叶绿素含量变化分析
3．4．3 SOD、POD、CAT及APX活性变化分析
3．5 MG时期番茄果实具有抗Pst DC3000的特性并且抑制表达SlSGR1增强BR番茄对Pst DC3000的抗性
3．6 MG时期番茄果实具有抗Botrytis cinerea的特性并且抑制表达SlSGR1增强BR番茄对Botrytis cinerea的抗性
4 讨论
4．1 SlSGR1参与调控光照下病原菌诱导的叶片衰老过程
4．2 H2O2参与调控病原菌诱导的叶片衰老及细胞的死亡
4．3 植物衰老和抗病反应中的PCD及HR鉴定方法探讨
参考文献
致谢
附录
附录一：小量法提取植物DNA
附录二：TriZOL一步法提取植物总RNA
附录三：PDA／PDB培养基的配方
附录四：KB培养基配方
