牛克隆胚发育相关基因启动子区DNA甲基化模式比较研究

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缩略词表(Abbreviations)

1 牛胚胎发育相关基因DNA甲基化研究进展

1.1 DNA甲基化研究进展

1.1.1 DNA甲基化

1.1.2 DNA甲基化作用机理

1.1.3 DNA甲基化研究方法

1.1.4 DNA甲基化与胚胎发育研究

1.2 牛克隆胚和体外受精胚研究进展

1.2.1 牛克隆胚研究现状及问题

1.2.2 牛体外受精胚研究现状及问题

1.3 相关基因与胚胎发育研究

1.3.1 OCT4基因

1.3.2 Nanog基因

2 试验目的与意义

2.1 试验内容

2.2 试验目的及意义

3 试验材料和方法

3.1 试验材料

3.2 主要仪器与设备

3.3 主要试剂盒

3.4 常用试剂及配制

3.5 主要的生物信息学网站及分析软件

3.6 胚胎DNA的提取

3.6.1 胚胎基因组DNA的提取步骤

3.6.2 亚硫酸氢盐修饰基因组DNA

3.6.3 PCR扩增目的片段

3.6.4 琼脂糖凝胶电泳检测

3.6.5 PCR产物的纯化与回收

3.6.6 目的片段与T载体连接

3.6.7 阳性转化子测序

3.6.8 甲基化分析

3.6.9 统计分析

3.7 胚胎RNA的提取

3.7.1 试验步骤

3.7.2 cDNA第一条的链的合成

3.7.3 实时荧光定量PCR反应

4 结果与分析

4.1 OCT4基因

4.1.1 OCT4基因启动子区CpG岛的相关信息

4.1.2 OCT4基因启动子区PCR扩增结果

4.1.3 OCT4基因启动子在不同时期死亡的克隆胚的甲基化分析

4.1.4 OCT4基因启动子在不同时期死亡的体外受精胚的甲基化分析

4.2 Nanog基因

4.2.1 Nanog基因启动子CpG岛的相关信息

4.2.2 Nanog基因启动子区PCR扩增结果

4.2.3 Nanog基因启动子在不同时期死亡的克隆胚的甲基化分析

4.2.4 Nanog基因启动子在不同时期死亡的体外受精胚的甲基化分析

4.3 定量结果

5 讨论

5.1 牛胚胎基因组DNA提取方法分析

5.2 OCT4、Nanog基因启动子在牛早期死亡胚胎的甲基化模式

5.3 定量结果分析

6 总结

6.1 研究小结

6.2 研究创新

6.3 研究不足

参考文献

附录

致谢