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苎麻根腐线虫生物学特性及苎麻抗病性研究

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文摘

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1.文献综述

1.1 植物根腐病及病原线虫

1.1.1 短体线虫

1.1.2 短体线虫分类

1.1.3 短体线虫生物学特性

1.2 苎麻根腐线虫病及研究现状

1.3 植物抗病基因克隆研究进展

1.3.1 基因对基因假说

1.3.2 植物的防卫反应

1.3.3 病原微生物的无毒基因

1.3.4 植物抗病基因

1.3.5 植物抗病基因类似物研究进展

2.材料与方法

2.1 苎麻根腐线虫人工培养技术研究

2.1.1 实验材料

2.1.2 胡萝卜愈伤组织的制备

2.1.3 线虫的获得和分离

2.1.4 线虫的培养

2.1.5 线虫的收集

2.2 不同培养时间、接种量和温度对根腐线虫繁殖力的影响

2.2.1 不同培养时间对线虫繁殖数量的影响

2.2.2 接种量对线虫繁殖数量的影响

2.2.3 不同温度对线虫繁殖数量的影响

2.3 苎麻根腐线虫对逆境的耐受力测定

2.3.1 根腐线虫对不同干燥程度的耐受力

2.3.2 根腐线虫对不同温度的耐受力

2.3.3 根腐线虫对紫外光的耐受力

2.4 苎麻根腐线虫的分子鉴定

2.4.1 材料与试剂

2.4.2 方法

2.5 根腐线虫对苎麻的致病力研究及苎麻品种抗病性

2.5.1 供试线虫

2.5.2 供试植物

2.5.3 供试植物的种植

2.5.4 接种线虫的准备

2.5.5 接种

2.5.6 结果检查

2.6 苎麻NBS类RGAs的分离研究

2.6.1 供试苎麻材料

2.6.2 试剂与试剂盒

2.6.3 引物设计

2.6.4 苎麻基因组总DNA的提取

2.6.5 PCR扩增

2.6.6 苎麻抗病基因类似物PCR产物目的片段回收

2.6.7 苎麻抗病基因类似物PCR产物目的片段克隆

2.6.8 苎麻抗病基因类似物PCR产物的序列测定与分析

3.结果与分析

3.1 苎麻根腐线虫人工培养技术研究

3.2 不同培养时间、接种量和温度对根腐线虫繁殖力的影响

3.2.1 不同培养时间对线虫繁殖数量的影响

3.2.2 接种量对线虫繁殖数量的影响

3.2.3 温度对线虫繁殖数量的影响

3.3 苎麻根腐线虫对逆境的耐受力测定

3.3.1 不同干燥程度对苎麻根腐线虫的影响

3.3.2 不同温度对苎麻根腐线虫的影响

3.3.3 紫外光对苎麻根腐线虫的影响

3.4 苎麻根腐线虫的分子鉴定

3.4.1 PCR扩增结果

3.4.2 序列分析

3.5 根腐线虫对苎麻的致病力研究及苎麻品种抗病性

3.5.1 根腐线虫致病力测定

3.5.2 苎麻品种抗病性鉴定

3.6 苎麻NBS类RGAs的分离研究

4.结论与讨论

4.1 苎麻根腐线虫人工培养技术研究

4.2 不同培养时间、接种量和温度对苎麻根腐线虫繁殖力的影响

4.3 苎麻根腐线虫对不同逆境条件的耐受力测定

4.4 苎麻根腐线虫的分子鉴定

4.5 根腐线虫对苎麻的致病力研究及苎麻品种抗病性

4.6 苎麻NBS类RGAs的分离研究

参考文献

附录

致谢

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摘要

苎麻根腐线虫病(Pratylenchus penetrans Cobb)是导致苎麻败蔸减产的原因之一,在生产上造成严重损失。本文利用PCR技术对苎麻根腐病的病原线虫进行了分子鉴定,利用用通用保守性引物F1(5’-CGTAACAAGGTAGCTGTAG-3’)和R1(5’-TCCTCCGCTAAATGATATG-3’)扩增线虫ITS序列,得到一段长度为1065bp的线虫rDNA-ITS区片段,序列分析结果表明该病原线虫是咖啡短体线虫(Pratylenchus coffeae)。
   对苎麻根腐线虫生长条件的研究表明,线虫的数量随着接种时间的延长而增加,随时间增加其繁殖系数也增加,但是由于食物和种群数量的限制,60-80天时的相对繁殖系数下降,线虫增长速度下降。在接种量分别为5、10、20、40头时,线虫数量随接种量增加而增加,但是在20头/片时繁殖系数最大,达到102.1。处理50天后,在20℃、25℃、30℃的温度下,线虫的繁殖系数分别为37.1、100.7和17,呈现出显著差异。因此苎麻根腐线虫的最佳培养条件为温度25℃,接种量20头/片,培养60天左右。
   在根腐线虫抗逆性的研究中发现,线虫对干燥抗性较差,在相对湿度为75%和85%时,20min内线虫全部死亡。-5℃处理2.5h即可造成线虫全部死亡,40℃处理1.5h后线虫死亡率就超过了50%。紫外光照射12min后存活率仅为4.7%。
   致病力和抗病性鉴定结果表明,华中农业大学苎麻试验田中分离并在胡萝卜愈伤组织上培养的根腐线虫对苎麻有致病能力。华苎4号、华苎5号、白脚麻、浏阳鸡骨白等品种对根腐线虫的抗性较强接种线虫后与对照无显著差异:广西黑皮蔸、细叶绿、湘苎1号等品种则是易感品种,在接种线虫后表现出感病症状。

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