梅花鹿IFN-γ基因的克隆表达及其在结核病诊断中的初步应用

摘要

ABSTRACT

缩略语表(ABBREVIATION)

第1章 文献综述

前言

1.1 结核病的流行现状及危害

1.1.1 结核病原与发病机理

1.1.2 野生动物结核病的流行现状及危害

1.1.3 鹿结核病的流行现状及危害

1.2 鹿结核病的诊断方法

1.2.1 细菌学诊断方法

1.2.2 分子生物学诊断方法

1.2.3 抗体检测方法

1.2.4 免疫学诊断方法

1.2.5 其它方法

第2章 梅花鹿IFN-Y的克隆、原核表达及生物活性分析

2.1 研究目的与意义

2.2 材料与方法

2.2.1 实验材料

2.2.2 试验方法

2.3 结果与分析

2.3.1 CerIFN-Y基因的克隆与鉴定

2.3.2 CerIFN-Y的生物信息学分析

2.3.3 重组CerIFN-Y表达产物SDS-PAGE分析

2.3.4 重组CerIFN-Y抗VSV活性的测定

2.3.5 重组CerIFN-Y抗IBRV活性的测定

2.3.6 CerIFN-Y理化特性分析

2.4 讨论

2.4.1 CerIFN-YRNA的提取

2.4.2 CerIFN-Y基因原核表达条件

2.4.3 CerIFN-Y基因生物信息学分析

2.4.4 CerIFN-Y应用前景

2.5 小结

第3章 梅花鹿Y干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究

3.1 研究目的意义

3.2 材料与方法

3.2.1 实验材料

3.2.2 试验方法

3.3 结果与分析

3.3.1 重组CerIFN-Y的表达与鉴定

3.3.2 间接IFA检测CerIFN-γ在MDBK/BHK-21细胞系中表达

3.3.3 间接ELISA法检测CerIFN-Y在动物哺乳细胞系中的表达

3.4 讨论

3.4.1 真核表达载体为pCI-neo的特点

3.4.2 组重质粒真核表达与鉴定

3.4.3 哺乳细胞系的选筛

第4章 抗CERIFN-Y单克隆抗体和多克隆抗体制备的研究

4.1 研究目的意义

4.2 材料与方法

4.2.1 材料

4.2.2 试验方法

4.3 结果与分析

4.3.1 免疫动物血清效价

4.3.2 细胞融合

4.3.3 杂交瘤细胞的筛选

4.3.4 小鼠腹水单克隆抗体效价的测定

4.3.5 多克隆抗体的生产和效价测定

4.3.6 杂交瘤细胞染色体数的检测

4.3.7 CerIFN-Y单克隆抗体的特异性

4.3.8 重组CerIFN-Y抗病毒活性阻断试验检测McAb的特异性

4.4 讨论

4.4.1 动物的免疫

4.4.2 细胞融合

4.4.3 杂交瘤阳性细胞株的筛选

4.4.4 杂交瘤细胞的亚克隆

4.4.5 杂交瘤细胞的冻存和复苏

4.5 小结

第5章 梅花鹿IFN-Y双抗体夹心间接ELISA方法建立及临床应用

5.1 研究目的和意义

5.2 材料与方法

5.2.1 材料

5.2.2 方法

5.3 结果与分析

5.3.1 IFN-Y夹心ELISA检测IFN-Y灵敏度与特异性

5.3.2 梅花鹿IFN-Y体外诱导率

5.3.3 梅花鹿IFN-Y体外释放法诊断结核病的灵敏度与特异性

5.3.4 结果的判定

5.4 小结

第6章 结论

参考文献

附录

致谢