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太湖藻浆梭菌鉴定与须白蚁Hospitalitermes sp.肠道内可培养厌氧细菌的多样性

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声明

摘要

1.1前言

1.1.1细菌的分类学研究

1.1.2梭菌属细菌的特征

1.1.3梭菌属细菌的研究现状

1.1.4研究的目的及意义

1.2材料与方法

1.2.1梭菌属菌株

1.2.2培养基

1.2.3实验所用溶液和试剂

1.2.5实验仪器和设备

1.2.6菌种鉴定的方法

1.3鉴定结果

1.3.1菌株的表型及生长特性

1.3.2系统发育分析

1.3.3生理生化分析

1.3.4菌株基因组DNA G+Cmol%含量的测定

1.3.5菌株菌体脂肪酸组分的测定

1.3.6菌株菌体极性脂组分的测定

1.3.7三株梭菌生物学特征的描述

1.4本章讨论

参考文献

第二章须白蚁Hospitalitermes sp.肠道内可培养厌氧细菌的多样性

2.1前言

2.1.1白蚁概述

2.1.2高等白蚁肠道生态环境

2.1.3高等白蚁肠道内的共生菌

2.1.4研究目的和意义

2.2材料与方法

2.2.1培养基及试剂

2.2.2其他常用试剂

2.2.3实验仪器和设备

2.2.4白蚁的采集和人工喂养

2.2.5须白蚁Hospitalitermes sp.肠道的解剖及菌悬液的制备

2.2.6须白蚁Hospitalitermes sp.肠道厌氧菌的富集培养

2.2.8须白蚁Hospitalitermes sp.肠道分离菌株的鉴定

2.2.9分离菌株的系统发育分析

2.2.10分离菌株的保藏

2.3实验结果

2.3.1须白蚁Hospitalitermes sp.肠道分离菌株的菌落形态

2.3.2须白蚁Hospitalitermes sp.肠道分离菌株的菌体特征

2.3.3Hospitalitermes sp.肠道分离菌株16S rRNA基因的ARDRA分析

2.3.4须白蚁Hospitalitermes sp.肠道分离菌株的ARDRA聚类分析

2.3.5须白蚁Hospitalitermes sp.肠道分离菌株的系统发育分析

2.4本章讨论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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摘要

生物圈是一个庞大且复杂的生态系统,在其中繁衍着大量的厌氧细菌,它们种类繁多且分布极为广泛,但迄今为止只有很少的厌氧细菌被分离出来。本论文对来源于太湖蓝藻藻浆和木食性白蚁肠道两个不同生境的厌氧细菌进行了研究,对丰富人们对厌氧菌生理特征和生态作用的认识具有重要的意义。论文的主要研究成果如下: 1.对从太湖蓝藻藻浆中分离出的三株梭菌进行了多相分类学鉴定 采用多相分类学方法对从太湖蓝藻藻浆中分离出的三株厌氧细菌MB9-7、MB9-9和MB8-21的表型、细胞组分及系统发育关系等特征进行了鉴定。菌株MB9-7和MB9-9为同种不同株,16S rRNA序列相似性达到99.7%,与酪丁酸梭菌(Clostridium tyrobutyricum)JCM11008T的相似性最高,为96.5%。菌株MB9-7和MB9-9均为革兰氏阳性菌,长杆状,1.0~1.2μm×4.0~5.0μm,生长最适盐度为0%,生长温度范围20℃-40℃,生长pH范围为4.0-7.5,均能利用葡萄糖、木糖,能水解酪素并产H2S,具有酸性磷酸酶等活性,菌体脂肪酸主要组分为C16∶0、C14∶0等,极性脂组分含有胺脂、磷脂、胺磷脂以及其他六种未知脂类,基因组DNA G+Cmol%含量分别为27.9mol%和28.7mol%,基于以上研究结果,将MB9-7和MB9-9鉴定为梭菌属新种,并命名为Clostridium algifaecis sp.nov.,模式株为MB9-7T(=CGMCC1.5188T=DSM28783T)。菌株MB8-21的16S rRNA序列与Clostridium leptum的亲缘关系最近,为91%。生长最适盐度为0%,生长温度范围20℃-50℃,生长pH范围为4.0-8.0,能利用葡萄糖、木糖等,能水解酪素并产H2S,G+Cmol%含量为43.2mol%,菌体脂肪酸成分主要为C14∶0、C12∶0等。经初步鉴定菌株MB8-21为梭菌属新种。对这三株梭菌的鉴定丰富了对梭菌属细菌的认识,为进一步探讨梭菌与蓝藻水华发生之间的关系奠定了基础。 2.对须白蚁Hospitalitermes sp.肠道可培养厌氧细菌进行了研究 在厌氧条件下对须白蚁Hospitalitermes sp.肠道内可培养厌氧细菌的多样性进行了分析。选用R2A培养基从该白蚁前中肠分离到48株细菌,这些分离株都是兼性厌氧细菌,分别是肠杆菌属(Enterobacter)、乳球菌属(Lactococcus)、乳酸菌属(Lactobacillus)、沙雷氏菌属(Serratia)细菌,乳酸菌属细菌明显为优势菌,占分离株总数的54.17%。其中得到的分离株R2A-40的16S rRNA基因序列与Lactococcusfujiensis NJ317T的同源性最高,为94%,初步认定其可能为乳球菌属的新种。选用JM-4培养基从后肠分离到59株细菌,这些分离株主要为严格厌氧菌,如梭菌属(Clostridium)和拟杆菌属(Bacteroides)细菌,也有少部分为兼性厌氧菌,梭菌属细菌占分离菌总数的71.2%,为优势菌。利用稻草培养基从全肠肠液的稻草降解富集菌群中分离得到22株细菌,主要为梭菌属、脱硫肠状菌属(Desulfotomaculum)严格厌氧细菌,梭菌属细菌在数量上占优势。对该白蚁肠道内可培养厌氧及兼性厌氧细菌的多样性分析表明,白蚁肠道菌群的分布与肠道的生态环境是密切相关的,严格厌氧细菌倾向于分布在氧分压很低的后肠。梭菌和拟杆菌是高等木食性白蚁肠道的优势共生菌,本论文的研究结果为进一步探讨共生细菌与白蚁协同降解木质纤维素的机制奠定了良好的基础。

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