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镉对小鼠睾丸生精细胞凋亡及相关基因蛋白的影响研究

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前言

材料与方法

1材料

1.1供试材料

1.2主要试剂

1.3主要仪器

1.4试剂配制

2方法

2.1镉对小鼠睾丸组织影响的组织学研究

2.2 DNA Ladder条带检测

2.3 TUNEL法定量检测生精细胞凋亡

2.4 bcl-2和bax免疫组织化学实验

结果与分析

1镉对小鼠睾丸组织形态学的影响

2睾丸组织生精细胞凋亡DNA特征性梯状带的检测

3 TUNEL法定量检测生精细胞凋亡

4氯化镉对小鼠睾丸生精细胞凋亡诱导基因bel-2和bax表达的影响

讨论

1镉的繁殖毒性

2镉对生精细胞凋亡的影响

3氯化镉诱导生精细胞凋亡的分子机制研究

4锌对镉的拮抗作用

结论

参考文献

致谢

作者简历

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摘要

在畜牧业生产中,有害金属镉通过饲料造成在畜禽产品中残留已被广泛关注.因为它不能降解,被运动吸收后,蓄积并残留引起动物中毒,如引起发育毒性、繁殖障碍引发动物生殖能力下降,并诱发癌症,甚至造成动物死亡,为此我们进行本研究.本实验以小鼠睾丸组织为动物模型,采用腹腔一次性注射氯化镉对小鼠进行攻毒,并设计一个拮抗组,分别于3天、6天、9天取小鼠睾丸,用H.E染色观察睾丸组织的形态等变化.提取生精细胞凋亡DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测其凋亡特征性梯状带.用TUNEL法定量检测生精细胞凋亡率,并用免疫组织化学方法检测对生精细胞凋亡诱导和抑制作用的基因蛋白bax和bcl-2的表达改变,并进行定位.实验结果表明:对照组和拮抗组睾丸组织正常,而镉中毒组受到不同程度的损伤,和对照组具有明显差异,并存在氯化镉的剂量和中毒时间的相关性.中毒组在琼脂糖凝胶电泳出现凋亡的特征性梯状带.各级生精细胞都出现凋亡,随氯化镉剂量和中毒时间的增加精母细胞、精子细胞、精子和精原细胞都受到不同程度的凋亡.各组之间出现表现出明显的差异.Bcl-2家族中的bax和bcl-2基因参与了生精细胞凋亡的调控,bax基因能促进细胞凋亡,而bcl-2基因则抑制细胞凋亡,而两者的蛋白表达都定位于细胞膜和细胞浆上.实验结论:氯化镉引起小鼠睾丸生精上皮损伤,导致生精障碍,各级生精细胞对镉敏感不同,精母细胞最敏感,其次是精子细胞、精子和精原细胞,bcl-2家庭中的bax和bcl-2基因参与了镉诱导生精细胞的凋亡调控.锌对镉中毒具有明显的拮抗作用.

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