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新型固相微萃取技术用于分析生物样品中醛类肺癌标记物

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摘要

对肺癌进行快速有效地早期诊断是降低肺癌病死率的重要手段,也是医学工作者一直致力探索研究的目标。近年来,随着代谢组学的兴起与快速发展,将其结合高效液相色谱分析技术,用于分离测定生物体液中的肺癌生物标志物,是无创、早期诊断肺癌的重要途径之一。由于生物体液中共存有大量的干扰物质,如需成功地完成生物样品中微量乃至痕量目标物质的分析,就需要高选择性的样品前处理方法,对复杂样品进行纯化、分离、浓缩并结合快速灵敏的分析检测方法进行测定。
   迄今为止,固相微萃取一直备受科研工作者的青睐,此技术集取样、分离、富集于一体。此外,固相微萃取方法经过不断的发展已呈现出了多种多样的萃取方式,如聚合物整体柱微萃取、搅拌吸附萃取、管内固相微萃取、分子印迹微萃取等。
   本文探索并提出了三种新型样品前处理方法,并将其结合高效液相色谱分离技术用于复杂生物样品(人血清、尿样)中肺癌代谢物小分子(己醛、庚醛)分析测定,在肺癌临床早期诊断研究中具有重要的参考价值。本文的主要研究内容如下:
   1.采用聚(甲基丙烯酸-乙烯乙二醇二甲基丙烯酸酯)聚合物-筛板固相微萃取同时结合原位衍生化反应的前处理方法,并与高效液相色谱技术联用,分析测定了体液中挥发性代谢物小分子(己醛、庚醛)。实验中首次选择聚丙烯筛板作为聚合物的合成载体,将合成好的聚合物-筛板作为一种新颖的萃取介质。以2,4-二硝基苯肼(DNPH)作为衍生化试剂,该方法适合一般生物样品的常规分析。
   2.采用聚二甲基硅氧烷-筛板吸附微萃取同时结合原位衍生化反应并联用高效液相色技术测定了人血清中己醛、庚醛。实验中,我们将聚二甲基硅氧烷(PDMS)合成于筛板上,将PDMS-筛板作为新型萃取介质,用于复杂血清样品的前处理。实验中考察了影响衍生化-萃取效率的各种因素。以此方法测定正常人和肺癌病人血清中己醛、庚醛的含量,确立了潜在的肺癌代谢物标记物小分子。
   3.采用氟化石墨的原位衍生化-固相萃取法,并与高效液相色谱法联用,用于分析测定了人血清中的肺癌代谢物小分子(己醛、庚醛)。实验中优化了一系列参数并于最佳条件下与传统的固相萃取(SPE-ODS)和PMME做了对比实验。最后以本方法完成了正常人和肺癌病人的血清中代谢物小分子的测定。

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