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淫羊藿总黄酮对小鼠隐睾与隐睾复位后睾丸生精功能的影响

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引言

材料与方法

1.1 材料

1.2 实验方法

结果

第一部分：淫羊藿总黄酮对隐睾小鼠的生精功能保护作用

讨论

第二部分：淫羊藿总黄酮对隐睾小鼠复位固定术后睾丸生精功能的恢复作用研究

讨论

小结

参考文献

综述

致谢

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著

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摘要

目的：通过手术建立小鼠隐睾模型,研究淫羊藿总黄酮对隐睾小鼠的生精功能保护作用,并初步探寻其可能的作用机制；通过对隐睾模型小鼠行隐睾复位固定手术,研究淫羊藿总黄酮对隐睾小鼠行复位固定术后睾丸的生精功能恢复的促进作用,进一步探索其对促进生精功能恢复作用的可能机制。
　　方法：(1)实验一：将小鼠睾丸提到腹腔并封闭内环口建立小鼠隐睾模型,将已建立隐睾模型的小鼠随机分为模型组、淫羊藿总黄酮低、高剂量组,另取假手术的小鼠作为假手术组,于造模手术第2天开始,淫羊藿总黄酮低、高剂量组分别灌服100 mg·kg-1、200 mg·kg-1的淫羊藿总黄酮,假手术组和模型组给予1%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)0.01 mL·g-1灌胃,每天1次,连续给药14 d后进行实验。末次给药24 h后,称小鼠体重并记录,处死小鼠,取睾丸并称湿重,切取一侧睾丸组织经横轴剪切、固定、包埋,经HE染色和电镜染色后分别进行睾丸组织显微、超微病理形态学分析,并对HE染色的病理切片作Johnsen评分分析,免疫组织化学方法检测睾丸组织中核增殖抗元(PCNA)的表达情况并作定量分析,剩余部分的睾丸组织通过PCR技术检测SOD2 mRNA、SITR3 mRNA的表达；另一侧睾丸组织匀浆,进行谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的含量检测；剪碎附睾于1 mL精子营养液中,检测精子密度和活率。(2)实验二：按实验一方法建立隐睾模型后,将已建立隐睾模型的小鼠随机分为模型组、淫羊藿总黄酮低、高剂量组,另取假手术的小鼠作为假手术组,常规饲养14 d后,对模型组及淫羊藿总黄酮低、高剂量组小鼠隐睾行隐睾复位固定手术,术后假手术组和模型组每天灌服1%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)0.01 mL·g-1,淫羊藿总黄酮低、高剂量组分别灌服100 mg·kg-1、200 mg·kg-1淫羊藿总黄酮,每天1次,各组小鼠连续给药14 d。于末次给药24 h后,称小鼠体重并记录,处死小鼠,取睾丸和附睾并称湿重,切取一侧睾丸组织经横轴剪切、固定、包埋制成蜡块,经HE染色和电镜染色后分别进行睾丸组织显微和超微病理形态学分析,另一侧的睾丸组织通过PCR技术进行SCF mRNA、GDNF mRNA的表达分析,另一侧睾丸组织进行生精细胞分离,用流式细胞技术检测睾丸生殖细胞周期。
　　结果：(1)淫羊藿总黄酮能够增加隐睾小鼠的睾丸重量,提高精子密度与精子活率；改善小鼠睾丸组织的病理学变化,增加小鼠睾丸组织的Johnsen评分；显著降低睾丸组织中MDA含量,提高SOD和GPX活性,上调SOD2 mRNA、SIRT3 mRNA的表达,调节氧化-抗氧化系统的平衡。(2)在隐睾模型小鼠复位固定手术后,淫羊藿总黄酮能够有效恢复睾丸生精小管上皮结构,促进精原干细胞与初级精母细胞进一步分裂成次级精母细胞,并促进次级精母细胞向精子细胞的转化,恢复各级生精细胞百分比,显著增加小鼠睾丸中GDNF mRNA、SCF mRNA的表达。
　　结论：(1)淫羊藿总黄酮能减轻隐睾所致的小鼠生精功能损伤,其作用机制可能与上调SIRT3表达,减轻氧化应激损伤有关。 (2)淫羊藿总黄酮能促进隐睾复位固定术后睾丸生精功能的恢复,其作用机制可能与上调SCF的表达,以促进精原干细胞的分化,进而促进小鼠睾丸生精功能的恢复相关。

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