声明
摘要
主要缩略词
第1章前言
第2章材料
2．1实验主要试剂
2．2实验主要菌株和载体
2．3实验主要仪器
2．4实验动物
2．5主要溶液的配置
2．5．1 10％SDS溶液
2．5．2免疫共沉淀缓冲液
2．5．6 SOC培养基
2．5．7 PBS溶液
2．5．9 10×TBST溶液
第3章方法
3．1构建荧光素酶报告载体
3．1．2合成小鼠组织的cDNA
3．1．3聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)
3．1．4 PCR产物凝胶电泳鉴定
3．1．5 PCR产物回收纯化
3．1．6 TA克隆及其连接产物的转化
3．1．7 TA克隆质粒的小量提取
3．1．8 TA克隆重组质粒酶切鉴定
3．1．9目的片段DNA测序
3．2．2目的片段Spata1与载体的回收纯化
3．2．4 Spata1重组表达质粒的双酶切鉴定
3．3 Western blotting分析
3．4重组质粒在CHO细胞、COS-1细胞的表达
3．4．2重组质粒转染至CHO细胞、COS-1细胞
3．5免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation assays)
3．6睾丸生精细胞、附睾精子的免疫荧光(IF)分析
3．6．1睾丸生精细胞、附睾精子的分离和收集
3．6．2免疫荧光(IF)分析
3．7睾丸切片的免疫荧光(IF)分析
3．7．1IF分析中睾丸切片的制备
3．7．2免疫荧光分析
第4章结果
4．1蛋白表达重组质粒的构建
4．3 SPATA1抗体的特异性
4．4 SPATA1在精子发生过程中的表达和定位
4．5 IFT20在睾丸生精细胞中的定位
4．6 IFT20缺失对SPATA1在睾丸中表达的影响
第5章讨论
第6章结语与展望
致谢
参考文献
综述
附录
