纳米铝辅佐的B群脑膜炎奈瑟菌0315重组蛋白疫苗免疫效果研究

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[目的]
　　初步探索氢氧化铝纳米颗粒（纳米铝）辅佐的B群脑膜炎奈瑟菌0315（Neisseria meningitides serogroup B,NMB0315）重组蛋白疫苗诱导实验小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平及其免疫保护效果，为寻找合适的rNMB0315疫苗佐剂、研制高效B群流脑疫苗提供实验依据。
　　[方法]
　　1.氢氧化铝纳米颗粒（Nanoparticles,NPs）理化特性鉴定。采用扫描电子显微镜（SEM）观察纳米铝的形貌及颗粒大小，zate电位仪测定纳米铝电势电位，BCA法测定纳米铝对rNMB0315蛋白的吸附性能。
　　2.制备rNMB0315疫苗。培养扩增含pET-30a/NMB0315质粒的E.coli BL21重组菌株（本课题组构建保存），诱导表达、纯化和鉴定rNMB0315蛋白。
　　3.检测rNMB0315疫苗的免疫活性和免疫保护效果。将所制备的纳米铝与纯化的rNMB0315蛋白以一定比例充分混合、吸附，肌注免疫雌性BALB/c小鼠，收集免疫小鼠生殖道分泌液和血清，间接ELISA法测定特异性sIgA、IgG及其亚类。末次免疫后2周，CCK-8法测定小鼠脾淋巴细胞增殖的刺激指数，ELISA法测定脾淋巴细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ含量。SBA法（serum bactericidal assay）检测实验小鼠免疫血清体外杀菌活性，观察记录rNMB0315疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。
　　[结果]
　　1.采用水热合成法制备的氢氧化铝纳米颗粒（纳米铝）具有良好的理化特性：径向尺寸均匀，形如棒状，径向长度约为100~200 nm；在ddH2O及rNMB0315蛋白溶液中的zeta电位值分别为48±1mv和26±6 mv，稳定性好；且纳米铝佐剂吸附能力强，当蛋白∶纳米铝质量比为2:1时，纳米铝能完全吸附rNMB0315蛋白。
　　2.纳米铝辅佐的rNMB0315蛋白疫苗（rNMB0315+NPs）能诱导高水平的体液免疫应答。特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和sIgA抗体效价峰值分别为1:131072、1:65536、1:32768、1:16384、1:32768和1:32768。在免疫峰值（第4、5周），血清特异性IgG2a/IgG1比值均小于1。
　　3.rNMB0315+NPs组能诱导高水平的细胞免疫应答，免疫小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数SI（1.849±0.144）明显高于rNMB0315+MPs组（1.470±0.174，P<0.05）。
　　4.rNMB0315+NPs组脾淋巴细胞培养上清IFN-γ（132.54±15.32 pg/mL）水平明显高于rNMB0315+MPs组（97.79±14.37 pg/mL，P<0.05）；IL-4水平rNMB0315+NPs组（185.36±31.37 pg/mL）与rNMB0315+MPs组（174.23+24.84 pg/mL）无显著性差异（P＞0.05）。
　　5.免疫第5周， rNMB0315组、rNMB0315+MPs组和rNMB0315+NPs组小鼠免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体滴度分别为1:64、1:128和1:128，致死剂量脑膜炎奈瑟菌攻击后免疫小鼠的存活率分别为65%、75%和80%。
　　[结论]
　　1.纳米铝辅佐的rNMB0315疫苗（rNMB0315+NPs）能诱导小鼠产生较强的体液免疫（包括黏膜免疫）和细胞免疫。
　　2.rNMB0315+NPs疫苗免疫血清体外杀菌活性较高，对实验小鼠具有较强的免疫保护作用。

著录项

作者
吴晓霞;
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作者单位

南华大学;

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授予单位南华大学;
学科基础医学
授予学位硕士
导师姓名胡四海;
年度 2017
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类医学免疫学;
关键词
B群脑膜炎奈瑟菌; 氢氧化铝纳米颗粒; 重组蛋白疫苗; 免疫应答; 动物实验;

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