B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用研究

代理获取

页面导航

目录
摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

[目的]构建B群脑膜炎奈瑟菌pcDNA3.1(+)/NMB0315真核表达重组载体，免疫雌性BALB/c小鼠，检测其诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效果及免疫保护作用，初步探讨 pcDNA3.1(+)/NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护效果，为研制一种新的预防B群流脑的核酸疫苗提供可靠的实验依据。
　　[方法]以B群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板，PCR扩增 NMB0315基因，克隆至pcDNA3.1(+)载体中，经 BamH I和Xho I双酶切及测序鉴定重组载体。将构建好的pcDNA3.1(+)/NMB0315重组载体经脂质体转染 COS-7细胞和RAW264.7细胞，采用免疫组织化学和Western blot法检测重组蛋白在真核细胞中的表达，RT-qPCR法检测NMB0315基因mRNA的相对表达水平。大量提取重组质粒，肌肉或腹腔皮下注射法免疫雌性BALB/c小鼠，间接 ELISA法检测核酸疫苗免疫小鼠血清中抗NMB0315特异性总IgG及其亚类抗体水平、小鼠生殖道黏膜分泌物中抗NMB0315特异性sIgA抗体水平及经pcDNA3.1(+)/NMB0315刺激后小鼠脾淋巴细胞上清液中IFN-γ、IL-4水平，CCK8法检测小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数（SI）；按一定比例混合乳兔补体、免疫血清及生长至对数期的MC58菌液，测定免疫血清体外杀菌效价；观察pcDNA3.1(+)/NMB0315核酸疫苗对感染 B群脑膜炎奈瑟菌雌性BALB/c小鼠的免疫保护效果。
　　[结果]成功构建的真核表达载体 pcDNA3.1(+)/NMB0315能够在真核细胞中有效转录和表达。pcDNA3.1(+)/NMB0315核酸疫苗具有良好的免疫原性，能诱导小鼠产生较高水平的体液免疫应答：包括血清特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG3、IgG2b和生殖道黏膜特异性sIgA，免疫后第6周抗体效价分别为1:50,000、1:40,000、1:35,000、1:30,000、1:15,000和1:30,000；在核酸疫苗免疫的2、4、6周，血清IgG2a/IgG1的比值分别为0.775，0.744，0.614，比值均小于1。核酸疫苗也能诱导产生较高水平的细胞免疫应答，疫苗免疫第6周，小鼠脾淋巴细胞增殖反应 SI值（1.87±0.124）明显高于PBS（0.68±0.132）、CpG（0.71±0.153）和pcDNA3.1（+）（0.69±0.144）对照组(P<0.001)。与体液免疫有关的细胞因子 IL-4（181.87±24.31pg/mL）和细胞免疫有关的细胞因子 IFN-γ（102.87±16.43pg/mL）的水平，pcDNA3.1(+)/NMB0315+CPG组均明显高于PBS、CpG和pcDNA3.1（+）对照组(P<0.001)。核酸疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1：128，72小时内对实验小鼠的免疫保护率为70％。
　　[结论]1.核酸疫苗pcDNA3.1(+)/NMB0315具有良好的免疫原性，能诱导实验小鼠产生高水平的体液免疫和细胞免疫；也能诱导生殖道黏膜局部产生较高水平的特异性sIgA抗体。2.核酸疫苗pcDNA3.1(+)/NMB0315对感染B群脑膜炎奈瑟菌的BALB/c小鼠具有良好的免疫保护效果；在补体介导下，末次免疫血清在体外具有较强的杀菌活性。

著录项

作者
李开铭;
展开▼
作者单位

南华大学;

展开▼
授予单位南华大学;
学科基础医学
授予学位硕士
导师姓名胡四海;
年度 2015
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类流行性脑脊髓膜炎（流行性脑膜炎）;
关键词
B群脑膜炎奈瑟菌; 外膜蛋白0315; 核酸疫苗; 免疫活性;
入库时间 2022-08-17 10:48:22

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用初步研究 [J] . 李开铭 ,谢梅花 ,余敏君 . 中国免疫学杂志 . 2015,第012期
2. C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NhhA重组载体pASK-IBA37 plus-nhhA的构建 [J] . 刘艳超 ,李旭红 ,王明晓 . 科学技术与工程 . 2018,第011期
3. 弓形虫主要表面抗原1核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫保护作用的研究 [J] . 沈健 ,仝德胜 ,钦亚萍 . 中国血吸虫病防治杂志 . 2006,第3期
4. 日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白核酸疫苗对猪免疫保护作用的研究 [J] . 朱荫昌 ,任建功 ,D.A.Harn . 中国血吸虫病防治杂志 . 2002,第1期
5. 日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(SjC FABP)核酸疫苗诱导小鼠免疫保护作用研究 [J] . 余传信 ,朱荫昌 ,殷旭仁 . 中国血吸虫病防治杂志 . 2002,第3期
6. 牛支原体外膜蛋白的提取及其免疫活性分析 [C] . 胡娟 ,李能章 ,周伟 . 中国奶业协会第26次繁殖学术年会暨国家肉牛耗牛/奶牛产业技术体系第3届全国牛病防治学术研讨会 . 2011
7. B群脑膜炎奈瑟菌NMB0315核酸疫苗与重组蛋白疫苗联合免疫效果初探 [A] . 宋迎春 . 2016

B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用研究

目录

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅