对三唑酮不同敏感性小麦白粉菌菌株的RAPD分子检测

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前言

1.1布氏白粉菌及抗药性

1.1.1病原菌

1.1.2小麦白粉病的症状

1.1.3布氏白粉菌产生抗药性的原因

1.2抗药性的定义及相关概念

1.3应用于禾谷类白粉病防治的杀菌剂品种

1.4布氏白粉菌对杀菌剂的抗性发展

1.4.1国外抗药性的发展

1.4.2国内抗药性的发展

1.5病菌抗药性机制

1.6抗药性遗传

1.6.1大麦白粉菌抗药性遗传

1.6.2小麦白粉菌抗药性遗传

1.7 DNA分子标记的主要类别

1.7.1 RFLP技术

1.7.2 RAPD技术

1.7.3 SCAR技术

1.7.4 AFLP技术

1.7.5 SSR技术

1.7.6 STS技术

1.8本研究的目的、内容和意义

2材料与方法

2.1小麦白粉病菌对三唑酮敏感性的测定

2.1.2供试材料

2.1.3抗药性测定方法

2.2不同敏感性的小麦白粉病菌株的RAPD分析

2.2.1供试材料

2.2.2所用试剂

2.2.3实验仪器

2.2.4培养基

2.2.5 RAPD反应体系

2.2.6菌株的繁殖和分生孢子的收集

2.2.7病菌总DNA的提取

2.2.8总DNA浓度检测

2.2.9 DNA池的配制

2.2.10扩增产物的电泳分离

2.2.11随机引物的筛选

2.3 RAPD标记的克隆及SCAR转化

2.3.1 DNA多态性片段的回收

2.3.2多态性片段的连接

2.3.3感受态细胞的制备

2.3.4大肠杆菌的转化

2.3.5重组质粒快速的提取

2.3.6多态性片段的克隆

2.3.7序列测定

2.3.8特异性引物的设计

2.3.9 SCAR标记对不同敏感菌株的检测

3结果与分析

3.1小麦白粉病菌对三唑酮敏感性的测定结果

3.2小麦白粉菌总DNA提取

3.3不同敏感性状菌株RAPD引物筛选结果

3.4 RAPD标记的克隆及SCAR转化

3.4.1 DNA多态性片段的回收

3.4.2多态性片段OPZ17的克隆

3.4.3克隆片段的序列测定结果

3.4.4特异性引物的设计

3.4.5 SCAR标记在不同敏感菌株的检测

讨论

4.1 RAPD技术的稳定性

4.2关于提高RAPD标记转化为SCAR标记的效率的探讨

4.3关于小麦白粉病菌敏感菌株的分子标记

4.4关于运用分子生物学技术检测对三唑酮抗药性的可行性

结论

参考文献

附录：RAPD随机引物

致谢