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AG490对人未成熟树突状细胞诱导初始性CD4+T细胞分化为Treg细胞影响的体外研究

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第一章 前言

第二章材料和方法

一．实验材料及仪器

二．实验方法：

第三章 结果

一、DC细胞的鉴定：

二.调节性T细胞(CD4+CD25+T细胞)转化率的检侧结果：

第四章 讨论

一、 人外周血来源单个核细胞分离及imDC的诱导分化、扩增、鉴定：

二、imDC细胞诱导调节性T细胞转化，JAK-STAT信号通路在DC细胞在Treg细胞转化过程中的作用

第五章 结论

参考文献

树突状细胞、调节性T细胞和免疫耐受

读研期间发表的论文

致谢

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摘要

目的:
　　利用人外周血获得未成熟树突状细胞,通过AG490对人未成熟树突状细胞诱导CD4+T细胞分化为CD4+CD25+T细胞转化率影响的体外研究,确定JAK-STAT信号传导通路其对CD4+T细胞转化为调节性T细胞的影响,研究人imDC诱导移植免疫耐受机制。
　　方法:
　　抽取一个健康成人肘静脉血50ml,用梯度密度离心法从血液标本中分离单个核细胞(PBMC),在37℃、5％CO2的条件下,10%FCS RPMI-1640完全培养液培养,加入GM-CSF(100ng/ml)和IL-4(50ng/ml)诱导,每3d半量换液1次,培养7天后收集疏松贴壁细胞。未成熟树突状细胞的鉴定:
　　1)在光镜下和倒置相差显微镜下进行形态学观察;
　　2)利用流式细胞术检测细胞的表面分子标志;
　　3)细胞功能测定。免疫磁珠分选法从另一个体脐血中分离CD4+T细胞,均分为5组细胞:
　　(1)空白组:CD4+T细胞加入等容量RPMI-1640单独培养;
　　(2)混合对照组:imDC与CD4+T细胞以1:10的浓度比例混合培养,不加其他试剂,诱导Treg;
　　(3)低浓度AG490组:imDC与CD4+T细胞以1:10的浓度比例混合培养同时加入终浓度为10μg/mL AG490;
　　(4)中浓度 AG490组:imDC与CD4+T细胞以1:10的浓度比例混合培养同时加入终浓度为30μg/mL AG490;
　　(5)高浓度AG490组:imDC与CD4+T细胞以1:10的浓度比例混合培养同时加入终浓度为50μg/mL AG490。再进行混合培养5天,以流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞转化率。
　　结果:
　　(1)imDC的鉴定:在形态学方面,培养至第7天的单个核细胞悬浮生长,表面可见毛刺状突起,体积较前增大。
　　(2)FCM检测Treg细胞的转化率:imDC与CD4+混合培养后, FCM检测Treg细胞的转化率,结果如下:空白组的Treg细胞转化率为1.74±0.18%,混合对照组的Treg细胞转化率为22.23±0.77%,而低浓度 AG490组为22.31±0.82%,中浓度 AG490组为41.39±1.87%,高浓度AG490组为42.32±1.18%。低浓度AG490组与混合对照组之间无显著性差异(P值>0.05),中浓度AG490组和高浓度AG490组之间也无显著性差异(P值>0.05),其余各组之间两两比较均有显著性差异(P值<0.05)。
　　结语:
　　(1)人外周血来源的imDC可以诱导CD4+T细胞转化成Treg细胞。
　　(2)JAK2/3信号通路特异性阻断剂 AG490可以部分促进 CD4+T细胞向Treg细胞的转化。说明JAK2/3信号通路在imDC诱导Treg细胞的生成和免疫耐受的诱导中起了重要作用。

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