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【6h】

miRNA let-7f对大鼠神经干细胞分化的调控作用

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目的:近年来的研究表明，miRNA let-7在神经细胞分化过程中表达增加，提示miRNA let-7家族可能参与调控神经干细胞(neural stem cells，NSCs)分化过程，但miRNA let-7f在NSCs分化中的作用尚未见报道。本研究将观察miRNA let-7f在大鼠NSCs分化过程中的表达和调控作用。
　　方法:1、应用实时荧光定量PCR(real-time fluorescenetquantitative PCR，qRT-PCR)技术对出生后1d、8d、14d SD大鼠脑组织中的miRNA let-7f进行分析，蛋白印迹法(western blot,WB)检测GFAP、Tuj1、nestin的变化;2、取胎鼠脑组织进行NSCs体外分离、培养及诱导分化，在分化后0d、3d、5d、7d分别观察miRNA let-7f、 GFAP、Tuj1、nestin的变化;3、构建大鼠miRNAlet-7f Inhibition及miRNA let-7f-1慢病毒载体，体外转染胎鼠NSCs，转染细胞分为对照组、空载体组(EGFP)、下调组(miRNAlet-7f Inhibition)、上调组(miRNA let-7f-1)，转染NSCs72h后观察各组nestin的表达情况，转染NSCs后诱导分化7d，观察GFAP、Tuj1的表达变化。
　　结果:1、随着日龄的增加，SD大鼠脑组织nestin的表达逐渐减少，miRNA let-7f、 GFAP、Tuj1的表达逐渐增加;2、成功培养出胎鼠NSCs，并在体外诱导分化，随着NSCs分化天数的延长， nestin的表达逐渐下降，miRNA let-7f、 GFAP、Tuj1的表达逐渐升高;3、在MOI=50，病毒滴度为1×108TU/mL，完全培养基条件下，慢病毒成功转染NSCs，48h后开始表达绿色荧光蛋白(EGFP)，72h后荧光强度达到最大，并在诱导分化后仍能稳定表达;4、慢病毒转染72h后，下调基因组nestin表达量明显高于其余三组，上调基因组nestin表达最低，差异均有统计学意义(P＜0.05);慢病毒转染NSCs后诱导分化7d，上调基因组GFAP、Tuj1的表达明显高于其余组，下调基因组GFAP、Tuj1的表达最低，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:miRNA let-7f与大鼠脑发育相关，下调miRNA let-7f的表达，促进NSCs增殖，抑制NSCs分化，而上调miRNA let-7f的表达则抑制NSCs增殖，促进NSCs分化，miRNA let-7f参与调控大鼠NSCs分化过程，有促进分化的作用。

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