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七氟醚预先吸入诱导HO-1表达对急性肺损伤大鼠肺内炎症反应的影响

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前言

第一部分不同浓度七氟醚预先吸入对ALI大鼠炎症反应的影响

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

4.结论

第二部分七氟醚预先吸入对ALI大鼠肺组织HO-1表达的影响

1.实验材料

2.方法

3.统计学处理

4.结果

5.讨论

6.结论

参考文献

综述 急性肺损伤与细胞调亡

个人简历

致谢

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摘要

第一部分 不同浓度七氟醚预先吸入对ALI大鼠炎症反应的影响 目的： 采用不同浓度七氟醚预先吸入LPS诱导的急性肺损伤大鼠，观察其对肺脏的ICAM-1和CINC-1 mRNA及其蛋白表达的影响。 方法： 48只雄性SD大鼠，腹腔注射20％乌拉坦1g/kg麻醉，气管切开插管行机械通气30min后，随机分成6组（每组8只）： （1）对照组（A组）；（2）单纯七氟醚吸入组（B组）；（3）1.5MAC七氟醚+LPS组（C组）；（ 4）1.0MAC七氟醚+LPS组（D组）；（5）0.5MAC七氟醚+LPS组（E组）；（6）内毒素组（F组）。F组机械通气30min后经股静脉注射LPS5mg/kg；A组机械通气30min后予股静脉注射等量生理盐水；B组吸入1.5 MAC七氟醚30min后予股静脉注射等量生理盐水，C、D、E组于股静脉注射LPS5mg/kg前分别吸入1.5、1.0、0.5MAC七氟醚30min。直接动脉测压监测MAP，记录并监测基础状态T0（吸七氟醚前即刻）、实验30min（吸七氟醚后即刻）T1、150min（给LPS后2h）T2、390min（给LPS后6h）T3四个时点MAP、动脉血气，6h后放血活杀大鼠，取肺组织分别测湿干重比（W/D）、HE染色行肺组织病理学评分；检测肺组织匀浆MPO活性；免疫印记（Western blotting）法检测肺组织ICAM-1、CINC-1蛋白的表达，RT-PCR法检测CINC-1、ICAM-1 mRNA的表达。 结果： （1）与A组比较：注射LPS各组（C、D、E、F组）肺组织W/D值均呈现不同程度增加（P<0.05）；组织病理形态学积分亦明显增高（P<0.05）。与F组比较：C、E组W/D值差异无显著性（P>0.05），D组W/D值下降明显（P<0.05）：C、D、E三组病理形态学积分明显减少（P<0.05），且D组下降最明显。单纯七氟醚吸入未引起明显肺脏病理形态学改变（P>0.05）； （2）与A组比较：注射LPS各组（C、D、E、F组）肺组织MPO活性升高，肺组织ICAM-1、CINC-1mRNA及其蛋白表达明显增加（P<0.05）；但七氟醚预先吸入组（C、D、E组）MPO活性和ICAM-1mRNA、CINC-1mRNA及其蛋白表达比F组低（P<0.05），且以C、D组明显，但C、D两组比较无差异（P>0.05），C、D两组与E组比较差异有统计学意义（P<0.05）。 （3）单纯1.5MAC七氟醚吸入对肺组织MPO活性、ICAM-1、CINC-1mRNA及蛋白表达均无明显影响，与A组比较无差异（P>0.05）。 结论： （1）股静脉注射LPS5mg/kg可成功复制ALI大鼠模型： （2）不同浓度七氟醚预先吸入均能不同程度减轻LPS所致ALI肺部炎症反应，其中以1.0MAC七氟醚为较适宜的吸入浓度。 第二部分 七氟醚预先吸入对ALI大鼠肺组织HO-1表达的影响 目的： 采用1.0MAC七氟醚预先吸入LPS诱导的ALI大鼠，观察HO-1在肺组织中的表达和意义。 方法： 48只雄性SD大鼠，腹腔注射20％乌拉坦1g/kg麻醉，气管切开插管行机械通气并维持至处死大鼠。机械通气20min后，大鼠随机分成6组（每组8只）：（1）对照组（A组）；（2）ZnPP预处理组（B组）；（3）单纯1.0MAC七氟醚预先吸入组（C组）；（4）1.0MAC七氟醚+LPS组（D组）；（5）ZnPP+1.0MAC七氟醚+LPS组（E组）；（6）LPS组（F组）。分组后B、E组股静脉注入ZnPP（10mg/ kg，10g·L-1），其余各组分别注入1ml/kg等体积生理盐水。10min后，C、D、E三组分别吸入1.0MAC七氟醚30min，D、E、F经股静脉注入LPS5 mg/kg，其余各组注射等体积生理盐水。6h后放血处死大鼠，留取肺组织标本，分别测湿干重比（W/D）、HE染色行肺组织病理学评分；检测肺组织MPO和HO-1活性；免疫印迹（Western blotting）法检测肺组织ICAM-1、CINC-1、HO-1蛋白的表达，RT-PCR法检测CINC-1、ICAM-1和HO-1mRNA的表达。 结果： （1）单纯ZnPP预处理组（B组）、单纯七氟醚吸入组（C组）对肺组织W/D、病理学积分、MPO和HO-1活性、CINC-1、ICAM-1和HO-1的表达均没有明显影响，与对照组（A组）比较，差异均没有统计学意义（P>0.05）； （2）与A组比较：注射LPS各组（D、E、F组）肺组织W/D均增加（P<0.05）；肺组织病理形态学积分均明显增高（P<0.05）。D组损伤较E、F组轻（P<0.05）； （3）与A组比较：注射LPS各组（D、E、F组）肺组织匀浆MPO活性升高，ICAM-1、CINC-1mRNA及其蛋白表达明显增加（P<0.05）。七氟醚预先吸入组（D组）MPO活性、ICAM-1、CINC-1mRNA及其蛋白表达均比E、F组低（P<0.05）；E组高于F组，差异有统计学意义（P<0.05）。 （4）注射LPS后F组HO-1活性、HO-1mRNA及其蛋白表达增加，与A组比较差异均有统计学意义（P<0.05）；而D组HO-1活性、HO-1mRNA及其蛋白表达较F组进一步增加（P<0.05）； E组HO-1活性、HO-1mRNA及其蛋白表达较D组和F组均低（P<0.05）。 结论： （1）肺组织HO-1的表达对ALI具有保护作用； （2）上调HO-1表达是七氟醚抑制ALI肺内炎症反应的作用机制之一； （3）HO-1特异性抑制剂ZnPP可消除七氟醚对ALI肺炎症反应的抑制作用。

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