人胚胎干细胞来源的间充质干细胞用于肿瘤基因治疗的研究

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间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是中胚层发育的早期细胞，具备成体干细胞的基本特性可在体外扩增、具有多向分化潜能，体内注射能够归巢到肿瘤部位并且在肿瘤部位聚集增殖。人胚胎干细胞(human embryonic stem cells，hESCs)是一种来自于囊胚的内细胞团的全能干细胞具有自我更新和多向分化潜能，遗传特性稳定，并能够在体外长期扩增而不丧失其分化的潜能。体外分化诱导发现hESCs可向MSCs方向分化，但对hESCs体内能否向MSCs分化尚不清楚，本课题将探索从hESCs体内分化产物——畸胎瘤中分离MSCs，并研究其作为肿瘤基因治疗的细胞载体的可行性。第一章：hESCs体内分化获取畸胎瘤，并从畸胎瘤中分离MSCs。目的：通过hESCs体内分化获取畸胎瘤，并从畸胎瘤中分离MSCs。方法：约5×106个hESCs(表达绿色荧光蛋白)注射至SCID-beige小鼠后腿肌间隙，8-10周后解剖小鼠取出畸胎瘤，病理切片可见三个胚层组织；同时将瘤组织剪碎、胰酶消化，用含有10ng/uL碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)的MSCs专用培养基Mesencult进行贴壁培养。结果：经过连续几次传代，获得了较纯的hESC来源的MSCs(hESC-MSCs)，荧光显微镜下均可见绿色荧光；核型检测为正常人类核型46，XX;该hESC-MSCs具有和骨髓来源的MSCs相似的形态特征，表现为短梭形或成纤维细胞样形态；对其进行流式细胞学检测发现，CD105、CD90、CD73、CD29和CD49b为阳性，CD14、CD34和CD45为阴性；体外诱导分化表明hESC-MSCs具有向脂肪细胞和骨细胞分化的潜能。结论：结果表明可从hESC的畸胎瘤中分离MSCs。第二章：hESC-MSCs向肿瘤迁移初步研究。目的：探索hESC-MSCs静脉内注射后在小鼠肿瘤组织中迁移情况，及其作为肿瘤基因治疗细胞载体的可行性。方法：通过BALB/C裸鼠右背部皮下注射2.5x106个BEL-7402细胞，建立肿瘤小鼠模型，当肿瘤组织生长至4-5mm左右时，分别通过尾静脉注射和直接肿瘤组织内注射5x104个hESC-MSCs细胞/裸鼠，注射6天后解剖裸鼠取出瘤组织，冰冻切片观察hESC-MSCs在裸鼠体内及肿瘤组织中的分布情况。结果：结果发现裸鼠肿瘤组织中可见表达绿色荧光的细胞，而在裸鼠的其他器官组织中未能检测到绿色荧光。结论：表明hESC-MSCs尾静脉注射后能够迁移裸鼠肿瘤组织中。

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作者
柳俊;
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作者单位

中南大学;

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授予单位中南大学;
学科遗传学
授予学位硕士
导师姓名梁德生;
年度 2007
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类肿瘤治疗学;
关键词
间充质干细胞; 人胚胎干细胞; 肿瘤; 基因治疗; 细胞载体;

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