I-insulin抗原与5μl血清在'/> IAA微量平板放射免疫检测法的建立及其临床应用-硕士-中文学位【掌桥科研】
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IAA微量平板放射免疫检测法的建立及其临床应用

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前言

第一部分胰岛素自身抗体微量平板放射免疫检测法的建立与评价

第二部分GADA、IA-2A、IAA联合检测对自身免疫糖尿病的诊断价值

第三部分IAA在中国糖尿病人群中的分布及其与临床特征的关系

结论

综述

致谢

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摘要

第一部分胰岛素自身抗体微量平板放射免疫检测法的建立与评价 目的: 1.建立胰岛素自身抗体(IAA)微量平板放射免疫检测法，并进行评价。2.比较国产人血清胰岛素抗体放射免疫(RIA)试剂盒和IAA微量平板放射免疫检测法的检测结果。 方法: 选择按1999年WHO标准诊断的尚未使用胰岛素治疗的T1DM患者71例，健康对照317例。将稀释的<'125>I-insulin抗原与5μl血清在平板上孵育72小时后，转移至包被好蛋白A的滤膜平板上，洗涤完毕后用Trilux多功能闪烁仪检测沉淀物的放射性计数，并换算成IAA指数进行结果判断。对检测的实验条件(放射计数、血清量、孵育时间和方式)进行优化,评价方法的批内和批间变异、重复性。参加2005年糖尿病自身抗体检测标准化评估(DASP 2005)来评价该方法的灵敏度与特异性。国产人血清胰岛素抗体RIA试剂盒与该方法分别检测96例的IAA或IA血清标本，比较两种方法的一致性。 结果: 1.检测条件优化加入放射计数为20000的<'125>I-insulin抗原及5ul血清缓慢振摇孵育72小时信噪比为最佳。2.方法的批内变异系数为4.1[％].8.5[％]，批间变异系数为4.5[％].10.7[％]，重复性检测中的三次结果判断完全一致，IAA指数呈显著正相关(r=0.729～0.917,P均<0.001)。3.317例健康人的IAA指数第99个百分位点为阳性阈值0.06，用该法检测71例T1DM患者阳性率为19.7[％]。4.盲法检测150例DASP2005标本，诊断T1DM的敏感性为50[％]，特异性为97[％]。5.国产人血清胰岛素抗体RIA试剂盒与之进行比较，结果判定总体一致率为72.9[％]，Kappa值=0.402，IAA或IA指数的相关系数为0.678(P<0.001)。 结论: 1.本研究建立的IAA微量平板放射免疫检测法重复性、灵敏度与特异性好，可用于临床及科研的IAA检测。2.国产人血清胰岛素抗体RIA试剂盒特异性好，敏感性不足，中低滴度的IAA或IA阳性患者易被漏诊。 第二部分 GADA、IA-2A、IAA联合检测对自身免疫糖尿病的诊断价值 目的：分析GADA、IA-2A、IAA单独或联合检测在不同类型糖尿病患者中的诊断价值。 方法：选择按1999年WHO标准诊断的尚未使用胰岛素治疗的T1DM患者71例，临床初诊T2DM患者551例，成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)患者94例。用微量平板放射免疫检测法检测IAA，用放射配体法检测GADA、IA-2A。观察三种抗体的检出分布，比较分析三种抗体单独或联合在不同类型糖尿病患者中的检测价值。 结果：1.T1DM组中，GADA、IA-2A、IAA阳性率分别为66.2％、45.1％、19.7％。IAA与GADA、IA-2A重叠率为85.7％，三种抗体联合检测的阳性率为80.3％。经典T1DM的IAA、GADA和IA-2A三种抗体联合检测的阳性率为89.0％，高于任一单个抗体阳性率(P<0.05=；成人T1DM三种抗体联合检测的阳性率为75.0％，高于IA-2A、IAA单个或联合阳性率(P<01001)。0-9岁组T1DM中IA-2A和IAA的阳性率分别为77.8％和55.6％，高于10岁及以上的T1DM患者(P<0.05)。各年龄段的T1DM患者GADA阳性率没有显著性差异。2.临床初诊T2DM患者中， GADA、IA-2A、IAA阳性率分别为6.72％、2.54％、1.45％。IAA与GADA、IA-2的阳性重叠率为12.5％，三种抗体联合检测的阳性率为9.27％，高于IA-2A，IAA单个或联合阳性率(P<0.001)。GADA抗体在25-34岁组阳性率最高，达24.0％，显著高于其它年龄段。IA-2A、IAA在各年龄段临床初诊T2DM患者中阳性率未发现显著性差异。 结论：GADA对自身免疫糖尿病的诊断敏感性最好，受年龄影响小，对年长的自身免疫糖尿病患者的诊断价值尤高。IAA、IA-2A的阳性率随年龄增加而下降，两者对儿童T1DM患者的诊断敏感性较高。GADA、IA-2A、IAA联合检测优于单一抗体检测，可提高自身免疫糖尿病诊断的敏感性。 第三部分 IAA在中国糖尿病人群中的分布及其与临床特征的关系 目的：初步探讨IAA在糖尿病患者中的频数分布特点及其与临床特征的关系。 方法：选择按1999年WHO标准诊断的尚未使用胰岛素治疗的T1DM患者71例，临床初诊T2DM患者551例，成人隐匿性自身免疫糖尿病(IADA)患者94例。以上患者均已进行了IAA、GADA、IA-2A的检测。观察IAA指数的频率分布情况，并根据IAA阳性与否进行分组，比较各亚组间的临床特征。 结果：1．匹配年龄后比较，中国T1DM人群中IAA阳性率低于其它国家的研究报道，与哥伦比亚、澳大利亚、芬兰、比利时、德国等的报道有显著性差异(P<0.05)，与英国、日本、阿根廷的报道无显著性差异(P>0.05)。2．健康对照组、临床初诊T2DM组、LADA组IAA指数的频数大致成正态分布，三组之间IAA阳性率没有统计学差异。3．T1DM与临床初诊T2DM患者中IAA阳性组与IAA阴性匹配组的临床特征(体重指数、糖化血红蛋白、HOMA指数、C肽水平)未发现统计学差异(P>0.05)。4．临床初诊T2DM患者中IAA阳性随访组与IAA阴性随访匹配组相比，空腹胰岛素水平、HOMA指数、糖化血红蛋白1年随访与基线的差值亦未发现有统计学意义(P>0.05)。 结论：1．中国糖尿病人群中IAA阳性率低，T1DM患者IAA阳性率低于其它国家的研究结果，临床初诊T2DM患者和LADA患者IAA阳性率与正常人无显著差异。2．IAA阳性的糖尿病患者未发现显著不同的临床特征，可能与样本量过小，IAA阳性率过低有关，有待扩大样本进一步研究，还有待扩大样本进一步研究。

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