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一种高效检测石蜡切片中的DNA的方法研究

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摘要

第一章 绪论

1.1 引言

1.2 关于提高PCR反应效率的研究进展

1.2.1 PCR及荧光定量PCR的定义

1.2.2 PCR的抑制因素和可能的解决方案

1.3 从石蜡切片中抽提DNA的研究进展

1.3.1 石蜡标本的处理及选择

1.3.2 脱蜡

1.3.3 DNA的提取方法

1.3.4 关于去除影响从石蜡切片中抽提出高质量的因素的研究

1.4 论文研究的目的及意义

第二章 一种新型PCR反应检测体系的建立

2.1 实验材料与试剂

2.1.1 实验材料

2.1.2 常用实验试剂及配方

2.1.3 试剂、工具酶和试剂盒来源

2.1.4 仪器设备

2.1.5 软件程序

2.2 实验方法

2.2.1 新鲜组织的抽提方法

2.2.2 石蜡标本的抽提方法

2.2.3 荧光PCR的方法对抽提好的DNA质量进行检测

2.3 实验结果

2.3.1 检测引物及探针的有效性

2.3.2 一种新型PCR反应添加剂的研制及验证

2.4 小结

第三章 从石蜡切片中抽提DNA的方法研究

3.1 实验材料与试剂

3.1.1 实验材料

3.1.2 实验试剂及配方

3.1.3 试剂、工具酶和试剂盒来源

3.1.4 仪器设备

3.1.5 软件程序

3.2 实验方法

3.3 实验结果

3.3.1 Qiagen试剂盒抽提石蜡标本DNA的检测结果

3.3.2 使用碱裂解法抽提石蜡标本DNA的检测结果

3.3.3 TE溶液加热脱蜡及蛋白酶K消化处理的抽提方法的检测及优化

3.4 讨论

第四章 新构建方法的适用性的检测

4.1 实验材料与试剂

4.1.1 实验材料

4.1.2 常用试剂及仪器设备

4.2 实验方法

4.2.1 石蜡切片中DNA的抽提方法

4.2.2 抽提后DNA的荧光PCR检测

4.3 实验结果

4.4 讨论

结论

致谢

参考文献

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摘要

为了克服传统石蜡标本中DNA较高的假阴性检测率,提高检出率准确性,本文从提高PCR反应效率和提高石蜡标本DNA抽提质量两方面进行研究。
  本文对12种PCR添加剂进行了研究。结果显示:海藻糖、DMSO、DTT、亚精胺、谷胱甘肽、甜菜碱都可以提高PCR反应效率和稳定性,建立了一种新型的荧光PCR反应检测体系。
  本文使用碱裂解法、TE溶液加热脱蜡及蛋白酶K与Chelex共同消化的方法对石蜡标本的DNA进行抽提。结果发现:石蜡标本经TE溶液加热脱蜡后Chelex与蛋白酶K共同消化处理获得的DNA可以较好的满足PCR检测的需求,其DNA检测结果与Qiagen试剂盒抽提的DNA的检测结果基本一致。建立了一个新的用于提取石蜡标本中DNA的方法。
  本文将500例石蜡标本进行抽提与检测。结果显示,新的抽提方法和新型荧光PCR反应体系对石蜡标本中DNA的检出率为94%(471/500),明显地增加了石蜡标本中DNA的检出率,可靠性强。
  研究表明:新构建的荧光PCR反应体系及石蜡标本DNA抽提方法可以满足普遍石蜡标本的检测要求,为以后石蜡标本的研究提供了一个较为可靠的检测平台。

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