17β-羟基类固醇脱氢酶10(17β-HSD10)的表达及应用

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17β-HSD10对于多种底物具有催化作用，现已证实，该酶参与3-羟基辅酶A、异亮氨酸、性激素和神经激素的新陈代谢过程。此外，17β-HSD10还参与大脑认知活动，在阿尔茨海默病（AD）患者和AD小鼠模型的脑中都检测到17β-HSD10的大量表达，预示着该蛋白作为诊断阿尔茨海默病的生物标志物的开发价值。
　　本文采用RT-PCR克隆得到小鼠肝脏17β-HSD10基因，构建了该基因的原核表达体系pET-15b-17β-HSD10/E.coliBL21(DE3)，IPTG诱导重组蛋白表达并优化表达条件;目的蛋白用His-Binding-resin纯化柱进行纯化，并免疫BALB/c小鼠和新西兰大耳白兔，免疫血清总IgG采用硫酸铵沉淀法纯化，用获得的高效价鼠源和兔源两种多克隆抗体，建立17β-HSD10双抗夹心酶联免疫检测方法(ELISA)。最终表达的蛋白分子量约为29.5kDa，纯化后浓度为1.5mg/mL，鼠源和兔源多克隆抗体效价分别为1.25×104和2.5×104，建立的检测方法对于多种羟基类固醇脱氢酶无交叉反应，特异性良好，可检出的阳性血清含量约为0.1μg/mL，具有较高的灵敏性。本文建立了一种更加快速，简便的17β-HSD10ELISA检测方法，为阿尔茨海默病的诊断提供基础。

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作者
王维;
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作者单位

长春理工大学;

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授予单位长春理工大学;
学科无机化学
授予学位硕士
导师姓名于源华;
年度 2013
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 Q554.9;
关键词
17β-羟基类固醇脱氢酶10; 阿尔茨海默病; 生物标志物; 双抗夹心酶联免疫检测; 多克隆抗体;

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