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金纳米粒子标记结合表面增强拉曼法对蛋白质的检测

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第一章 文献综述

1.1表面增强拉曼散射的机理及应用

1.1.1表面增强拉曼散射概述

1.1.2表面增强拉曼散射的机理

1.1.3几种标记方法在免疫分析中的应用

1.2工作的意义

参考文献

第二章金纳米粒子的制备与表征

2.1前言

2.2实验部分

2.2.1实验药品

2.2.2实验仪器

2.2.3 30nm金纳米粒子的制备

2.2.4 13nm金纳米粒子的制备

2.3金纳米粒子的表征

3.3.1紫外吸收光谱表征(UV)

3.3.2透射电镜分析(TEM)

2.4小结

参考文献

第三章溶液中蛋白质体系的制备与拉曼光谱检测

3.1前言

3.2实验部分

3.2.1实验药品

3.2.2实验仪器

3.2.3 Protein A-gold的制备

3.2.4 Protein A-gold and IgG-biotin的制备

3.2.5 Protein A-gold-IgG-biotin-avidin-fluorescein的制备

3.3结果与讨论

3.3.1具有拉曼活性的体系制备

3.3.2紫外吸收光谱(UV)

3.3.3拉曼光谱(SERS)

3.4小结

参考文献

第四章生物芯片的制备及拉曼光谱检测

4.1前言

4.2实验部分

4.2.1实验药品

4.2.2实验仪器

4.2.3多肽稳定的金纳米粒子的制备

4.2.4多肽芯片的制备

4.2.5蛋白质芯片的制备

4.2.6银增强过程

4.3结果与讨论

4.3.1多肽芯片的拉曼光谱检测

4.3.2蛋白质芯片的拉曼光谱检测

4.3.3蛋白质的定量分析

4.4小结

参考文献

致 谢

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摘要

目前,生命科学研究已经进入单分子、单细胞阶段,即分子或细胞水平上研究生命活动规律,疾病的发生与发展,药物与机体的相互作用等。表面增强拉曼(SERS)技术是拉曼散射光与金属纳米粒子发生表面等离子共振而产生的拉曼增强现象,因具有高检测灵敏度已经成为生命分析及单分子研究重要手段。本论文以表面增强拉曼的方法为检测手段,金纳米粒子为基底,研发了新型的蛋白质检测方法。 首先,通过调节反应初始混合物中还原剂以及配体/稳定剂与氯金酸的比例,选择性的可控合成了13nm及30nm金纳米粒子,作为表面增强拉曼反应的基底。 其次,我们研发了一种在溶液中以金纳米粒子为基底结合SERS光谱分析的方法,实现简单且高灵敏度的用于蛋白质间相互作用的检测的方法。实验结果表明,这种方法对蛋白质的检测具有较低检测限和相对较大的线性响应范围,此方法对溶液中IgG的识别最低浓度为1 ng/ml。 最后,我们研发了一种在生物芯片上,以金纳米粒子为探针,利用SERS光谱对蛋白质间的反应和多肽进行检测的高灵敏度,高选择性的检测方法。实验结果表明,这种方法对于多肽及蛋白质间的相互作用的检测具有很低的检测限和较大的线性响应范围。在这种新型光谱分析方法中,芯片上多肽样品点的最低检测限为10 fg,在蛋白质间相互作用体系中,对溶液中蛋白质(IgG)的检测浓度为0.1 μg/mL,对芯片上蛋白质样品(Protein A)的最低检测限为100 fg。

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