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无选择标记植物表达载体的构建及转基因大豆的获得

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第一章绪论

第一节、植物基因工程研究概况

一、植物基因工程研究概况及其缺陷

二、发展转基因大豆的意义

第二节、去除选择标记基因的策略

一、共转化系统

二、同源重组

三、MAT(Multi-auto-transformation)载体系统

四、位点特异性重组系统

五、转座子系统

第三节pX6-GFP载体的研究概况

第二章材料与方法

一、实验材料

(一)实验菌株

(二)质粒

(三)植物材料

(四)主要试剂

(五)主要仪器

二、实验方法

(一)培养基的配制

(二)抗生素的配制

(三)质粒DNA提取方法

(四)植物基因组提取方法

(五)聚合酶链式反应

(六)质粒、PCR产物的酶切体系

(七)酶切片段去磷酸化

(八)连接与转化

(九)外源基因在大豆中的表达

第三章结果与分析

一、目的质粒的构建

(一)中间质粒pN-GFP的构建

(二)含大豆种子特异性启动子表达载体p952-GFP的构建

二、转基因大豆的获得

(一)转基因大豆的组织培养

(二)质粒在大豆中的表达

三、去除选择性标记植株的获得

第四章讨论

一、目的质粒的构建

二、转基因大豆的获得

三、去除选择性标记植株的获得

结 论

参考文献

附录

致谢

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摘要

去除转基因植物中的选择性标记可以减轻标记基因对环境的潜在危害,并能降低人们对转基因植物的担忧。为了获得无选择性标记的转基因大豆,本文对一种可化学诱导的Cre/loxP位点特异性DNA重组体系pX6-GFP载体进行改造,将其G10-90启动子替换成为大豆种子特异性启动子952,构建出新的p952-GFP载体。将p952-GFP通过农杆菌介导的方法转入大豆子叶节中,获得转基因植株。在5μM/L β-雌二醇的诱导下,选择性标记同Cre、XVE片断夹在两个loxP位点中间被诱导下来,从大豆的基因组中切除,同时下游报告基因GFP(绿色荧光蛋白)得以表达。

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