牛瑟氏泰勒虫p23表面蛋白基因与牛白细胞介素18基因在原核和真核细胞中的串联表达

代理获取

页面导航

目录
摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫（Theileria sergenti）寄生于牛的红细胞以及淋巴细胞内，所引起的一种血液原虫病。近年来随着养牛业的不断发展，牛瑟氏泰勒虫病的发生也呈上升趋势，严重影响相关国家的畜牧业发展。但由于目前尚无临床应用疫苗，而严重影响养牛业的健康发展。
　　因此，本研究从牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因和牛白细胞介素-18基因着手，根据 GenBank上报道的两基因核苷酸序列，设计两对特异引物，利用SOE-PCR技术扩增 p23-IL-18融合基因，将其克隆到 pMD18-T载体，构建pMD18-T-p23-IL-18重组克隆质粒，经PCR和酶切鉴定后测序，再将p23-IL-18融合基因亚克隆到 pET-28a原核表达质粒构建 pET-28a-p23-IL-18，并转化至大肠杆菌进行诱导表达，将表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析；以克隆质粒pMD18-T-p23-IL-18为模板，经PCR扩增得到用于真核表达的融合基因片段p23-IL-18，并将其克隆到pMD18-T上，在将融合基因亚克隆到真核表达质粒pVAX-I构建pVAXI-p23-IL-18，经PCR和酶切鉴定后，将表达转染至BHK21细胞，收集培养细胞进行RT-PCR及IFA检测。
　　结果表明，成功克隆了p23-IL-18融合基因，并在大肠杆菌中获得表达，表达蛋白大小约为48 ku，可被牛瑟氏泰勒虫阳性血清识别；成功构建了牛瑟氏泰勒虫 pVAXI-p23-IL-18真核表达质粒，RT-PCR与 IFA结果表明，融合基因在BHK21细胞中成功转录，并获得表达。
　　本试验结果为牛瑟氏泰勒虫病基因工程亚单位疫苗和DNA疫苗研究奠定了基础。

著录项

作者
孙平杰;
展开▼
作者单位

延边大学;

展开▼
授予单位延边大学;
学科预防兽医学
授予学位硕士
导师姓名许应天;
年度 2012
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类牛;兽医寄生虫病学;
关键词
牛瑟氏泰勒虫; 血液原虫病; p23表面蛋白基因; 真核细胞; 牛白细胞介素-18;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 牛瑟氏泰勒虫P23主要表面蛋白基因的克隆及原核表达 [J] . 李文学 ,李海峰 ,金清洙 . 安徽农业科学 . 2010,第016期
2. 牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的克隆与原核表达 [J] . 金春梅 ,薛书江 ,张守发 . 畜牧与兽医 . 2009,第6期
3. 牛瑟氏泰勒虫双拷贝p33表面蛋白基因在原核细胞中的串联表达 [J] . 杨兴 ,许应天 ,张守发 . 中国预防兽医学报 . 2010,第008期
4. 牛瑟氏泰勒虫P23和P33表面蛋白双基因融合表达载体的构建及原核表达 [J] . 曹世诺 ,于龙政 ,薛书江 . 中国预防兽医学报 . 2008,第011期
5. 牛瑟氏泰勒虫p23-IL-18融合基因的原核表达 [C] . 孙平杰 ,海旭南 ,孙静 . 中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会 . 2013
6. 牛瑟氏泰勒虫P23和P33表面蛋白重组基因在原核和真核细胞的表达 [A] . 曹世诺 . 2009

牛瑟氏泰勒虫p23表面蛋白基因与牛白细胞介素18基因在原核和真核细胞中的串联表达

目录

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅