DGGE 技术在人参重茬地土壤微生物多样性分析中的应用研究

代理获取

页面导航

目录
摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

人参（Panaxginseng C.A.Mey.）是忌连作性极强的植物，虽然人参已有1700多年栽培历史，但连作导致人参植株长势减弱，产量、品质和抗病能力明显降低的特性并未发生根本性改变。多年来，国内外许多学者从不同角度对人参重茬障碍机制进行了广泛、深入的研究，并将人参重茬障碍归结于土壤理化性状恶化、营养失衡、土壤有益微生物和有益酶类减少等因素。本文从人参重茬地土壤微生物角度入手，采集三年生、四年生、未种参的重茬地和一年生人参初种地土壤的不同时期、不同生长季节土壤样品，利用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳分析技术（PCR-DGGE）对其微生物多样性进行分析和研究，其结果如下：
　　1、对三种土壤微生物基因组DNA的提取方法进行比较分析结果，方法一和方法二提取的DNA虽然提取总量较大，但方法一提取的DNA浓度非常低；方法二提取的DNA纯度低且存在抑制剂（腐殖酸、色素等）的成分，PCR扩增看不见谱带，无法进行后续研究；方法三可提取高纯度的DNA，且可以进行PCR扩增，适合后续研究。方法三和方法一、二的主要区别就是增加了纯化过程，足以证明手工提取方法（SDS）存在着提取DNA纯度不够的缺陷，手工提取方法获得的DNA必须加以纯化，以便于后续研究。试剂盒法提取的土壤微生物DNA纯度较高，且有利于后续PCR扩增，为最优选择。
　　2、对嵌套式聚合酶链式(PCR)反应体系和条件进行优化结果，第一套PCR扩增,用细菌的通用引物Primer A和Primer B扩增全长16S rDNA；第二套PCR扩增，以第一套扩增产物为模板，引物用Primer C和Primer D扩增16S rDNA特异区；reconditioning PCR，把第二套PCR产物稀释为原浓度的1/10做为模板，引物采用Primer C和Primer D，除去第二套PCR扩增中的异二聚体。通过琼脂糖电泳检测，可以得到符合后续实验要求的理想谱带。
　　3、对变性梯度凝胶电泳分析（DGGE）中的各项条件参数进行优化结果，电泳温度为60℃；电泳第一阶段60V,1h；第二阶段100V,18h；浓度梯度范围在40％～60％范围内，在染色液中染色1h。通过琼脂糖电泳检测，可以得到较为清晰的理想谱带。
　　4、对三年生、四年生及未种参的重茬地土壤和一年生人参初种地土壤样品，进行PCR-DGGE分析结果,三年生、四年生及未种参的重茬地土壤和一年生人参初种地土壤样品间微生物（细菌）种类存在较大差异。所有土样共有菌群为，条带B（Ensifer adhaerens相似率98%）、条带D（Sphingomonas sp. J52相似率95%）、条带F(Acinetobacter sp.相似率97%)、条带H（Uncul tured alpha proteobacterium clone651相似率97%）、条带I（Stenotrophomonas maltophilia partial 相似率82%）、条带K（Gordonia sp. F867相似率85%）。三年生人参重茬地特异性菌群为，条带E（Uncultured Comamonadaceae bacterium相似率93%）、条带G（Curvibacter lanceolatus strain JPPB B27相似率86%）、条带J（Uncultured Shewanella sp.相似率95%）；四年生人参重茬地特异性菌群为，条带 A（Uncultured Brucellaceae bacterium相似率98%）、条带N（Rhodoferax sp. IMCC1723相似率97%）；未种参重茬地特异性菌群为，条带C（Sinorhizobium sp. B69sp相似率97%）、条带L（Propion ibacterium sp.相似率92%）、条带M（Uncultured Raoultella sp.相似率89%）。

著录项

作者
金海林;
展开▼
作者单位

延边大学;

展开▼
授予单位延边大学;
学科作物遗传育种
授予学位硕士
导师姓名金东淳;
年度 2010
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 S567.510.1;
关键词
人参; 重茬地土壤; 微生物多样性; DGGE技术;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 基于PCR-DGGE技术的剑湖湿地湖滨带土壤微生物群落结构多样性分析 [J] . 刘绍雄 ,王明月 ,王娟 . 农业环境科学学报 . 2013,第007期
2. DGGE技术在土壤微生物多样性分析上的研究进展 [J] . 刘权钢 ,金东淳 ,刘敬爱 . 延边大学农学学报 . 2012,第002期
3. PCR-DGGE技术在水牛瘤胃产甲烷菌多样性分析中的应用 [J] . 刘园园 ,姜伟伟 ,秦红玉 . 南方农业学报 . 2011,第009期
4. PCR-DGGE技术在水牛瘤胃产甲烷菌多样性分析中的应用 [J] . 刘园园 ,姜伟伟 ,秦红玉 . 南方农业学报 . 2011,第009期
5. PCR-DGGE与Biolog技术在土壤微生物多样性研究中的比较 [J] . 邢华铭 ,杜海涛 ,张黎黎 . 农业开发与装备 . 2013,第010期
6. DGGE技术在土壤微生物群落分析中的应用研究 [C] . 张娣 ,王继华 ,广慧 . 第六届中国青年生态学工作者学术研讨会 . 2010
7. 武汉市东湖、南湖、汤逊湖水体水质及其基于PCR-DGGE技术的细菌多样性分析 [A] . 陶新园 . 2016

DGGE 技术在人参重茬地土壤微生物多样性分析中的应用研究

目录

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅