长链非编码RNA H19在黑色素瘤中作用的研究

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恶性黑色素瘤的恶性程度很高，但是发病率较低，约占到人体全身恶性肿瘤的4%～5%，不过在导致皮肤癌患者死亡的病因中，70%以上属于该肿瘤。肿瘤以及转移瘤患者预后很差，五年生存率仅约为20%。临床上可通过各种途径来诊治恶性黑色素瘤，但目前最有效的方法还是早期诊断以及早期手术扩大切除、淋巴结清扫。到目前为止，导致黑色素瘤发生的确切的分子机制，尤其是分子转移机制在很大程度上仍然是未知的。在多种肿瘤的发病、病情进展的过程中，长链非编码RNA起到了非常重要的作用。目的：探讨长链非编码RNA H19对黑色素瘤的影响。方法：本研究对82例黑色素瘤患者的瘤组织及癌旁正常皮肤组织进行分析，手术中取得黑色素瘤组织及癌旁正常皮肤组织。通过实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）测定样本黑色素瘤细胞中H19的表达。通过CCK-8试剂盒检测、细胞侵袭实验和划痕实验来测定细胞增长及转移率。通过流式细胞技术来测定细胞周期和细胞凋亡率。H19对上皮间质转化过程中的相关基因差异表达的影响是通过RT2ProfilerTMPCR array来检测的。使用蛋白质印迹法测定细胞内蛋白质的水平。构建稳定表达H19siRNA2（H19_shRNA2）的1205Lu细胞，进行裸鼠皮下成瘤实验。结果：与正常的邻近皮肤组织相比，H19在黑色素瘤组织中表达明显增多，黑色素瘤转移患者体内的H19组织表达水平也明显高于未远处转移患者的。另外，H19在黑色素瘤组织中的高表达与黑色素瘤患者总体存活时间短有关。体外活性检测结果显示，通过敲低黑色素瘤细胞中H19的表达水平，可显著降低黑色素瘤细胞增殖、侵袭和迁徙的能力，并诱导黑色素瘤细胞凋亡以及导致细胞周期G0/G1停滞。RT2ProfilerTMPCR array和蛋白质印迹法（Western-blot）实验表明，敲低H19表达可差异调节上皮间质转化（EMT）相关基因的表达并逆转黑色素瘤细胞株中的EMT进程。敲低黑色素瘤细胞中H19的表达水平可显著降低在裸鼠模型中皮下种植瘤的发育速度。结论：上调H19的表达可促进黑色素瘤细胞的生长。H19可能是黑色素瘤生长转移的致癌lncRNA。本研究结果显示了H19在黑色素瘤发生发展中的重要作用，H19可能成为恶性黑色素瘤治疗的新靶点。

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作者
史高峰;
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作者单位

南京医科大学;

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授予单位南京医科大学;
学科临床医学
授予学位博士
导师姓名谭谦;
年度 2018
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类
关键词
长链; 非编码; H19; RNA; 黑色素瘤;

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