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摘 要
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Abstract
目 录
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第一章绪论
1.1 miRNA
1.1.1 miRNA概述
1.1.2 miRNA的生物合成与作用机制
1.1.3 miRNA与疾病
1.2.2 NF-κB激活途径
1.2.3 NF-κB与疾病
1.3 Treg/Th17与类风湿性关节炎(RA)
1.3.1 Treg/Th17概述
1.3.2 类风湿性关节炎(RA)
1.3.2.1 类风湿性关节炎概述
1.2.2.2 类风湿性关节炎动物模型研究进展
1.3.3 类风湿性关节炎与Treg/Th17
1.4 本研究的目的、内容、方法、实验设计以及意义
1.4.1 研究目的
1.4.2 研究内容
1.4.3 研究方法
1.4.4 实验方案
1.4.4.1 体外验证miR-34a对Foxp3的调节作用
1.4.5 研究意义
第二章 miR-34a对Foxp3的表达调控
2.1 实验材料
2.1.1 主要试剂、仪器
2.1.2 主要溶液的配制
2.2 实验方法
2.2.1 小鼠淋巴瘤细胞(EL-4)的准备
2.2.2 EL-4细胞转染agomiR-34a和antagomiR-34a
2.2.3 不同炎症微环境培养转染后的EL-4细胞
2.2.4 Immunoblot技术检测Foxp3的蛋白水平
2.3 实验结果
2.3.1 miR-34a的模拟物能够抑制Foxp3的蛋白水平
2.3.2 miR-34a的抑制物能够促进Foxp3蛋白的表达
2.4 小结
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3.1.1 主要试剂、仪器与相关引物
3.1.2 主要溶液的配制
3.1.3 实验动物
3.2 实验方法
3.2.1 Na?ve T细胞的分选及诱导
3.2.2 NF-κB抑制剂对miR-34a的影响以及对Foxp3的调节作用
3.2.3 qPCR检测miR-34a的mRNA水平
3.2.4 Immunoblot技术检测Foxp3的蛋白水平
3.2.5 统计学处理
3.3 实验结果
3.3.1 NF-κB参与CD4+T中IL-6/TNF-α对miR-34a的表达调控
3.3.2 NF-κB抑制剂能够逆转CD4+T中IL-6/TNF-α对Foxp3的抑制作用
3.4 小结
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第四章 miR-34a对CIA模型鼠中Treg/Th17平衡的影响
4.1 实验材料
4.1.1 主要试剂、仪器
Anti-mouse CD4-PE
Anti-mouse CD25-APC
Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set
4.1.2 主要溶液的配制
4.1.3 实验动物
4.2 实验方法
4.2.1 类风湿性关节炎小鼠模型(CIA)的建立
4.2.2 小鼠模型的分组及处理
4.2.3 小鼠模型的观察指标及肿胀评分标准
4.2.4 影像学检查
4.2.5 模型鼠脾脏以及腘窝、腹股沟、腋窝淋巴结的分离
4.2.6 脾脏细胞和淋巴结细胞的CD4+T细胞的分选
4.2.7 Treg细胞染色
4.2.8 Th17细胞胞内因子染色
4.2.10 统计学处理
4.3 实验结果
4.3.1 miR-34a过表达能够加重CIA模型鼠疾病的严重程度,
4.3.2 小鼠脾脏和淋巴结的Treg/Th17占CD4+T细胞的比例
4.3.3 小鼠关节病理学检查
4.3.4 小鼠关节影像学检查
4.4 小结
第五章
第五章 miR-34a转基因鼠对胶原诱导性关节炎易感性研究
5.1 实验材料
5.1.1 主要试剂、仪器
5.1.2 主要溶液的配制
5.1.3 实验动物
5.2 实验方法
5.2.1 miR-34a转基因小鼠CIA模型的建立及分组
5.2.2 小鼠模型的观察指标及肿胀评分
5.2.3 影像学检查
5.2.4 模型鼠腘窝,腹股沟、腋窝淋巴结以及脾脏的分离
5.2.5 Treg细胞染色
5.2.7 Th17细胞胞内因子染色
5.2.8 HE染色检测小鼠关节病理损伤情况
5.2.9 统计学处理
5.3 实验结果
5.3.1 miR-34a转基因鼠的CIA病情加重
5.3.2 小鼠脾脏和淋巴结的Treg/Th17细胞占全部细胞的比例
5.3.3 小鼠关节病理学检查
5.3.4 小鼠关节影像学检查
5.4 小结
第六章:主要结论及展望
6.1 本课题的主要结论:
6.2 讨论及展望
参考文献
综述:Treg/Th17细胞的平衡与类风湿性关节炎的研究进展
免疫系统是机体识别自我和危险信号从而执行免疫功能的系统,免疫细胞在机体识别“自我”和去除“非我”过程
一.Treg生物学功能
Treg(reguletary T cell,Treg)在免疫应答的负向调控和自身免疫耐受中起着重要
二.Th17生物学功能
Th17细胞因其分泌IL-17细胞因子而得名[8],Th17细胞是最早参与抗感染应答的效应细胞,当外
三.Treg/Th17失衡与RA的发病
Treg与Th17之间的关系是近年来免疫学研究的一大热点,这二者的发现为自身免疫性疾病提供了新的研究
四.Treg/Th17的调节与RA的治疗
综述参考文献
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[2]Liu X, Gao N, Li M, Xu D, Hou Y, Wang Q, et al. El
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[22]Moon HG, Kang CS, Choi JP, Choi DS, Choi HI, Choi
[29]Petrillo MG, Ronchetti S, Ricci E, Alunno A, Gerli
致 谢
攻读硕士学位期间发表的文章及参加的会议