金黄色葡萄球菌临床分离株的生物膜形成及相关基因检测

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目的:
　　检测临床分离的金黄色葡萄球菌生物膜形成情况及其相关基因,构建金黄色葡萄球菌ica同源重组质粒,为研究其生物膜形成机制的奠定基础。
　　方法:
　　 1.全自动微生物分析仪法和mecA基因PCR扩增检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌临床株的耐药分型和基因;
　　 2.利用96孔板结晶紫染色法检测临床菌株生物膜形成情况;
　　 3.分别采用扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜验证临床菌株生物膜形成;
　　 4.PCR法检测金黄色葡萄球菌生物膜形成相关基因ica,sarA,agr,及mgrA;
　　 5.构建金黄色葡萄球菌ica同源重组质粒。
　　结果:
　　 1.92株金黄色葡萄球菌临床株经mecA基因检测出MRSA74株,检出率为80.4%(74/92),全自动微生物分析仪检测出苯唑西林耐药69株,耐药率为75%,两种检测方法的一致率为94.6%(87/92);
　　 2.在TSBgluc0.5%培养基中,92株金黄色葡萄球菌临床分离株均可形成肉眼所见的生物膜,其中63株生物膜形成能力较强;
　　 3.扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜下分别观察到菌株JB-37生物膜的结构;
　　 4.PCR检测结果显示92株实验菌株均具有sarA基因,其中78株具有ica操纵子,88株具有agr基因,89株具有mgrA基因;
　　 5.成功构建了金黄色葡萄球菌ica同源重组质粒。
　　结论:
　　金黄色葡萄球菌临床株MRSA的检出率很高,在TSBgluc0.5%培养基中,金黄色葡萄球菌临床株均可形成肉眼可见的生物膜,但形成能力有不同,ica操纵子是生物膜形成关键基因,但不含ica基因也可形成生物膜,提示存在独立于ica以外的途径。92株临床株普遍存在sarA、agr和mgrA基因,提示生物膜形成是多基因作用的结果,并可能还有一些未知因素的参与。成功构建了金黄色葡萄球菌ica同源重组质粒。

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作者
潘红;
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作者单位

江苏大学;

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授予单位江苏大学;
学科临床检验诊断学
授予学位硕士
导师姓名邵世和;
年度 2012
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 R378.11;
关键词
金黄色葡萄球菌; ica基因; 同源重组; 临床分离株; 生物膜形成; 基因检测;

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