声明
第1章 绪论
1.1 研究背景
1.2 黄瓜花叶病毒研究现状
1.2.1 黄瓜花叶病毒的危害及利用
1.2.2 黄瓜花叶病毒的粒子形态和基因组特征
1.2.3 黄瓜花叶病毒的症状表现
1.2.4 黄瓜花叶病毒的株系划分
1.2.5 黄瓜花叶病毒的防控策略
1.3 黄瓜花叶病毒基因间隔区的研究进展
1.3.1 正链RNA病毒非编码区序列的功能简述
1.3.2 基因间隔区与亚基因组RNA4的合成
1.4 病毒样症状植株的病原鉴定方法
1.4.2 已知病毒的检测方法
1.4.1 未知病毒的检测方法
1.5 研究目的及意义
1.6 研究内容
第2章 一个黄瓜花叶病毒新寄主的发现
2.1 前言
2.2 材料和方法
2.2.1 实验材料
2.2.2 主要试剂配方
2.2.3 主要仪器设备和生物信息学软件
2.2.4 摩擦接种实验
2.2.5 dsRNA的提取和进一步纯化
2.2.6 dsRNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和银染
2.2.7 dsRNA的DOP-PCR扩增
2.2.8 DOP-PCR产物的克隆和序列鉴定
2.2.9 黄瓜花叶病毒萝藦分离物的全基因组序列扩增
2.2.10 RT-PCR检测
2.2.11 进化树的构建
2.3 结果
2.3.1 摩擦接种
2.3.2 萝藦叶中提取的dsRNA 的PAGE电泳
2.3.3 dsRNA的DOP-PCR扩增和测序分析
2.3.4 黄瓜花叶病毒萝藦分离物的全基因组序列扩增
2.3.5 RT-PCR
2.3.6 进化树的构建
2.4 讨论
第3章CMV-Fny RNA3基因间隔区的功能
3.1 前言
3.2 材料和方法
3.2.1 实验材料
3.2.2 重要试剂的配制
3.2.3 近RNA4转录起始位点的预测
3.2.4 突变体表达载体的构建
3.2.5 转化农杆菌
3.2.6 农杆菌注射接种实验
3.2.7 总蛋白的SDS-PAGE
3.2.8 外壳蛋白的Western blot检测
3.2.9 RNA3和RNA4的Northernblot检测
3.2.10 半定量RT-PCR
3.3 结果
3.3.1 突变体表达载体的构建
3.3.2 转化野生型RNA3和缺失突变体的农杆菌的鉴定
3.3.3 农杆菌注射接种本氏烟的症状观察
3.3.4 外壳蛋白的Western blot检测
3.3.5 探针的制备
3.3.6 Northernblot检测结果
3.3.7 半定量RT-PCR
3.4 讨论
结论
参考文献
附录
附录1：CMV-Met 全基因组序列扩增的引物设计示意图
附录2：分离胶和浓缩胶的配方
附录3：中英文缩略表
攻读硕士学位期间发表的学术论文
致谢
