酪氨酯羟化酶基因启动子调控外源性Calbindin D-28k特异性表达转基因小鼠的鉴定

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目的：检测酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase，TH)基因启动子调控外源性Calbindin D-28k特异性表达转基因小鼠脑内不同区域钙结合蛋白D-28k( Calbindin D-28k，CaBP)特异性表达情况，以验证已建立的转基因小鼠系。
　　方法：提取转基因小鼠DNA，聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)检测转入的外源性Calbindin D-28k。筛选出携带该目的基因的阳性小鼠，扩群。免疫荧光观察转基因小鼠和正常小鼠的嗅球（Olfactory Bulb，OB）、黑质（Substantia Nigra，SN）、海马（hippocampus，Hi）、小脑(cerebellum，CB)及大脑皮层( cerebral Cortex，CC)中CaBP阳性细胞的数量和与TH共表达情况。选取稳定表达外源性Calbindin D-28k小鼠设为转基因组(Tg)，未表达外源性基因的小鼠设为转基因阴性对照组(nTg)，野生型小鼠为正常对照组（wild）。蛋白质印迹方法检测三组小鼠上述五个区域CaBP的表达量。
　　结果：PCR检测4只转基因阳性原代鼠的子代，结果显示，2只原代鼠能稳定遗传外源性Calbindin D-28k。取2号原代鼠F1代作为种子，扩群繁殖，F3、F4代中外源性Calbindin D-28k都能稳定遗传，转基因小鼠数量达到35只，用2号原代鼠初步建立转基因小鼠系。
　　进一步检测转基因小鼠外源性Calbindin D-28k在脑内不同部位的特异性表达，免疫荧光结果显示，转基因小鼠嗅球、黑质的CaBP阳性细胞数显著多于正常鼠(P＜0.05）。而海马、小脑、大脑皮层的CaBP阳性细胞数与正常小鼠无明显差异。
　　蛋白质印迹结果显示，转基因组小鼠嗅球及中脑黑质部CaBP表达量显著高于转基因阴性组和正常组小鼠（P＜0.05）。而海马、小脑、大脑皮层的CaBP表达量与转基因阴性组和正常组小鼠无明显差异。转基因阴性组小鼠上述五个区域CaBP的表达量与正常组小鼠无明显差异。
　　结论：转基因小鼠能稳定遗传外源性基因；外源性Calbindin D-28k在其嗅球、黑质致密部特异性过表达；成功建立转基因小鼠系。

著录项

作者
姜超;
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作者单位

徐州医科大学;

徐州医学院;

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授予单位徐州医科大学;徐州医学院;
学科人体解剖学与组织胚胎学
授予学位硕士
导师姓名高殿帅,朱孝荣;
年度 2011
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类免疫生物学;
关键词
转基因; 动物模型; 酪氨酯羟化酶; 基因启动子; 特异性表达; 基因调控;

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