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GDNF信号转导受体在行为差异的老年大鼠中脑黑质多巴胺能神经细胞中的表达

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材料和方法

1.材料

2.方法

结果

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结论

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参考文献

综述 GDNF信号传导及CAM的结构与介导的信号传递研究

攻读硕士学位期间发表学术论文题目

临床培训小结

致谢

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摘要

目的:帕金森病(Parkinson's disease,PD)是以中脑黑质致密部(substantia nigrapars compacta,SNc)的多巴胺(dopamin,DA)能神经细胞进行性退变为主要病理特征的神经系统疾病。已知胶质细胞系源性神经营养因子(glial cell line-derivedneurotrohic factor,GDNF)能有效地保护中脑黑质DA能神经细胞。GDNF发挥生物学作用要经膜受体介导,已知的GDNF受体有配体结合受体GDNF家族受体α1(ODNF family receptorα1,GFRα1)和跨膜信号转导受体RET以及属于细胞粘附分子家族的可能受体NCAM-140,integrinβ1和N-cadherin。本研究旨在探讨在老年大鼠黑质部(SN)DA能神经细胞中上述受体的表达变化,探讨其发生机制。
　　 方法:1.老年大鼠的筛选及分组将78只老年SD大鼠进行行为学筛选,首先进行衣架试验,按评分高低进行排序(评分相同的按照潜伏期长短排序),挑选出前30只和后30只;然后进行水迷宫试验,按照其找到圆台的时间长短排序,从评分较高的前30只中挑选所用时间短的前12只作为行为学表现好的老年大鼠组(老年优组),从后30只中挑选出所用时间长的前12只作为行为学表现差的老年大鼠组(老年差组);再取12只健康成年SD大鼠作为对照(成年组);每组6只用于免疫组化染色,6只用于免疫印迹及高效液相色谱-质谱检测;2.检测取经行为学筛选出的表现好的和表现差的健康雄性SD老年大鼠(≥18月龄)和正常成年大鼠(4～5月龄)免疫印迹检测蛋白表达,免疫组织化学染色,灰度分析电泳条带,分别对黑质部DA神经元TH、NCAM-140、RET、integrinβ1及N-cadherin进行分析,并行三组大鼠各指标间的两两比较。
　　 结果:(1)行为学筛选结果显示衣架试验:评分结果老年优组＞老年差组;潜伏期老年优组＞老年差组,差异均有统计学意义(p＜0.05);水迷宫试验:老年大鼠找到圆台的时间老年差组＞老年优组,差异有统计学意义(p＜0.05),所以老年优组的行为学表现优于老年差组。(2)免疫组化染色结果显示成年组大鼠黑质致密部TH+细胞成簇分布,排列密集,胞体大,形状规则,胞浆丰富,胞核着色淡,核仁明显,胞质染色深;老年差组大鼠黑质致密部TH+细胞散在分布,TH+细胞数量少,胞体小,胞浆染色较淡,核仁不明显;老年优组大鼠黑质致密部TH+细胞形态介于两者之间。(3)免疫印迹法结果显示:大鼠黑质部TH、RET、NCAM-140、integrinβ1和N-cadherin各总蛋白的表达均为:成年组＞老年优组＞老年差组,成年组与老年优组,老年优组与老年差组之间差异均无统计学意义(P＞05),成年组与老年差组之间差异有统计学意义(p＜0.05);(4)高效液相色谱-质谱联用法测定纹状体DA含量结果显示:成年组＞老年优组＞老年差组。老年优组高于老年差组,二者差异有统计学意义(p＜0.05);成年组高于老年优组,二者差异有统计学意义(p＜0.05)。
　　 结论:在中脑黑质多巴胺能神经细胞中,GDNF的受体RET和作为细胞粘附分子的可能受体NCAM-140,integrinβ1和N-cadherin表达降低,与DA能神经细胞的退变存在一定关系。

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