首页> 中文学位 >牛骨骼肌卫星细胞成脂诱导中Wnt/β-catenin信号通路相关miRNA的鉴定及分析
【6h】

牛骨骼肌卫星细胞成脂诱导中Wnt/β-catenin信号通路相关miRNA的鉴定及分析

代理获取

目录

声明

论文说明

摘要

常用缩略语

第一章 文章综述

1 骨骼肌卫星细胞

1.1 动物肌肉生成概述

1.2 卫星细胞的体外分离培养方法

1.3 卫星细胞的纯化

1.4 骨骼肌卫星细胞的鉴定

1.5 肌卫星细胞的遗传调控与信号传导通路

2 Wnt/β-catenin信号通路概述

2.1 Wnt蛋白

2.2 Wnt信号在成脂中的作用

2.3 Wnt信号在成肌过程中的作用

3 miRNA概述

3.1 miRNA的成熟和作用机制

3.2 miRNA和siRNA的区别

3.3 miRNA在骨骼肌、Wnt通路和脂肪组织中的研究

第二章 牛骨骼肌卫星细胞原代培养以及鉴定

1 材料与方法

1.1 实验地点和时间

1.2 实验动物

1.3 主要酶和试剂

1.4 主要仪器

2 试验方法

2.1 骨骼肌卫星细胞的分离培养

2.2 骨骼肌卫星细胞的纯化、传代

2.3 骨骼肌卫星细胞诱导分化

2.4 骨骼肌卫星细胞鉴定

3 结果与分析

3.1 牛骨骼肌卫星细胞形态学鉴定

3.2 骨骼肌卫星细胞诱导分化

3.3 细胞免疫化学检测骨骼肌卫星细胞标志性基因表达

4 讨论

第三章 骨骼肌卫星细胞成脂诱导中Wnt/β-catenin信号相关miRNA表达谱研究

1 材料与方法

1.1 试验地点和时间

1.2 实验动物

1.3 试剂

1.4 主要仪器

2 试验方法

2.1 实验分组及处理

2.2 RNA提取

2.3 骨骼肌卫星细胞miRNA微阵列分析

2.4 cDNA合成反应

2.5 qRT-PCR

2.6 miRNA靶基因预测以及GO注释和KEGG信号通路富集分析

2.7 数据分析

3 结果与分析

3.2 总RNA提取质量控制

3.3 芯片杂交与扫描

3.4 芯片检测结果

3.5 芯片结果验证

3.6 差异表达的miRNAs GO和KEGG分析

4 讨论

全文结论

参考文献

致谢

展开▼

摘要

分化的骨骼肌卫星细胞是一类多能干细胞,它不仅存在于幼年动物,而且存在于成年哺乳动物。之前的研究表明,Wnt/β-catenin信号通路参与调控多能细胞分化,并且对于多能细胞的成脂分化至关重要。MicroRNA是哺乳动物体内的一种内源性非编码RNA,并且在动物脂肪形成过程中起着非常重要的作用,然而miRNA在Wnt信号介导下牛骨骼肌卫星细胞成脂诱导中的作用却很少受到关注。
  1、牛骨骼肌卫星细胞原代培养以及鉴定
  本试验采取肉牛后腿骨骼肌组织,通过机械分离将细胞剪碎后用胶原酶和胰蛋白酶双酶法消化为单个细胞后,采用差速贴壁法纯化贴壁细胞,从而获得骨骼肌卫星细胞;通过对骨骼肌卫星细胞成肌分化显示,细胞在第二天开始有部分肌纤维出现,在第四天时,已有大量肌纤维出现,并且开始融合为粗大的肌管;通过成脂诱导分化显示在诱导分化12天后,用油红O染色,可以看到有脂滴形成并被染色,说明其分化性良好;通过免疫荧光技术对骨骼肌卫星细胞特异性基因Pax7进行验证,结果显示95%以上细胞呈阳性表达,说明本实验培养的骨骼肌卫星细胞可以用于下一步实验。
  2、骨骼肌卫星细胞成脂诱导中Wnt/β-catenin信号相关miRNA表达谱研究
  LiCl激活Wnt/β-catenin信号通路,通过成脂诱导分化,基因芯片技术筛选了成脂分化过程中不同组差异表达的miRNA,并且通过生物信息学技术对这些差异表达的miRNA进行分析,结果数据显示,在783个已知的牛miRNA中有29个差异表达(foldchange>2),其中有12个miRNA表达上调,17个miRNA表达下调;生物信息结果显示,有24个miRNA与脂肪代谢、细胞分化,以及免疫系统有关;在315个靶基因中有39个靶基因不同程度的参与了脂肪细胞的形成、代谢以及干细胞的分化和免疫反应。GO分析以及KEGG通路表明,这些差异表达的miRNA通过不同通路和靶基因参与了骨骼肌卫星细胞的成脂诱导。综上所述,我们研究首次在Wnt/β-catenin信号通路调控下牛骨骼肌卫星细胞成脂诱导中对miRNA的差异表达进行检测,并且构建了起了miRNA表达谱和其与目的基因的联系,为更深入的了解牛骨骼肌卫星细胞成脂诱导过程中差异表达的miRNA对Wnt/β-catenin信号通路调控提供了有力证据。

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
代理获取

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号