COG复合体亚基COG3在花粉管生长中的功能研究

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摘要

缩略语

第一章 文献综述

1．1 花粉的发育

1．2 花粉的体内萌发

1．3 花粉体外萌发

1．3．1 细胞壁与花粉管的生长

1．3．2 离子与花粉管的生长

1．3．3 小G蛋白与花粉管的生长

1．3．4 细胞骨架与花粉管的生长

1．4 囊泡运输与花粉管的生长

1．4．1 囊泡运输的基本过程

1．4．2 囊泡运输在花粉管生长中的作用

1．5 高尔基体与COG复合体

1．5．1 高尔基体

1．5．2 COG复合体的发现及结构

1．5．3 COG复合体的功能

1．5．4 COG复合体可能的作用方式

1．6 本论文的立题依据及研究目的

第二章 材料与方法

2．1．1 植物材料

2．1．2 菌株及质粒载体

2．1．3 酶、试剂及各种化学药品

2．2 实验仪器

2．3 实验方法

2．3．3 拟南芥RNA的提取及第一链cDNA的合成

2．3．4 引物设计及PCR扩增

2．3．5 PCR扩增产物的回收

2．3．6 限制性内切酶反应

2．3．7 DNA片段的连接

2．3．8 大肠杆菌感受态的制备

2．3．9 大肠杆菌质粒提取

2．3．10 农杆菌感受态的制备

2．3．11 农杆菌的转化

2．3．12 农杆菌浸染拟南芥

2．3．13 本实验所需要的克隆载体的构建

2．3．14 拟南芥的人工杂交

2．3．16 DAPI染色

2．3．17 Alexander染色

2．3．18 拟南芥花粉体外萌发

2．3．19 拟南芥花粉体外液体萌发

2．3．20 拟南芥花粉体内萌发和苯胺蓝染色观察

2．3．21 拟南芥花粉体外萌发的苯胺蓝染色和钌红染色

2．3．22 拟南芥花粉体外萌发的Calcofluor染色

2．3．23 拟南芥花粉体外萌发的免疫荧光染色

2．3．24 扫描电子显微镜观察拟南芥花粉

2．3．25 拟南芥花粉的超薄切片

2．3．26 酵母双杂交

第三章 实验结果

3．1 COG3基因的突变影响雄配子体的传递

3．1．2 cog3突变体的遗传分析

3．2 COG3基因在拟南芥幼苗、雄配子体和胚胎中都有表达

3．3 COG3基因的突变影响花粉管的生长

3．3．2 COG3基因的突变并未影响到花粉的发育

3．3．3 COG3基因的突变使得花粉管生长出现畸形、爆裂和生长受抑制

3．3．4 COG3基因的突变影响花粉管的体内生长

3．4 COG3能够回补突变体雄性不育的表型

3．4．1 cog3纯合突变体影响胚胎的发育

3．4．2 COG3蛋白定位在高尔基体

3．5 COG3基因的突变影响高尔基体的形态

3．6 COG3基因的缺失影响了高尔基体潴泡的逆向运输

3．7 COG3基因的缺失影响了部分花粉管细胞壁多糖的定位

3．8 植物细胞中的COG复合体的组织结构

讨论

1 COG3基因的缺失影响雄配子体的传递

2 COG3基因的缺失影响了花粉管细胞壁部分多糖组分的分布

3 COG复合体是高尔基体内的一种栓系因子

全文总结以及研究的创新之处

附录

参考文献

致谢