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‘南通小方柿’组培快繁及叶片再生体系的建立

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摘要

缩略词(Abbreviation)

引言

第一章 文献综述

1 柿生物学特性及应用价值

1.1 柿生物学特性

1.2 应用价值

2 影响柿组织培养的相关因子研究进展

2.1 外植体

2.2 培养基

2.3 植物生长调节剂

2.4 其他影响因素

3 柿组织培养目前存在的问题及解决途径

3.1 玻璃化

3.2 褐化

3.3 再生率

3.4 激素的使用

3.5 生根难

第二章 南通小方柿的初代培养

1 试验材料

2 试验方法

2.1 外植体的灭菌及接种前处理

2.2 启动培养

3 培养条件

4 数据分析方法

5 结果与分析

5.1 不同消毒方法对南通小方柿初代影响

5.2 不同基本培养基对南通小方柿休眠芽初代影响

5.3 基本培养基、ZT和NAA组合对休眠芽初代培养的影响

6 讨论

第三章 ‘南通小方柿’的继代增殖培养

1 材料

2 试验方法

2.1 不同浓度赤霉素对南通小方柿继代增殖影响

2.2 不同种类、浓度的细胞分裂素对组培苗生长的影响

2.3 不同种类、浓度的细胞生长素对组培苗生长的影响

2.4 不同生长调节剂对小方柿组培苗生根的影响

3 培养条件

4 数据分析方法

5 结果与分析

5.1 不同浓度GA3对南通小方柿继代增殖影响

5.2 不同种类、浓度的细胞分裂素对组培苗生长的影响

5.3 不同种类、浓度的细胞生长素对组培苗生长的影响

5.4 不同种类浓度的植物生长调节剂对组培苗生根的影响

6 讨论

第四章 ‘南通小方柿’叶片再生体系的建立

1 试验材料

2 试验方法

2.1 基本培养基、TDZ、NAA和暗培养天数对小方柿叶片再生的影响

2.2 不同激素对小方柿叶片愈伤组织不定芽分化的影响

3 培养条件

4 数据分析方法

5 结果与分析

5.1 基本培养基、TDZ、NAA以及暗培养对小方柿柿叶片再生的影晌

5.2 不同细胞生长素对小方柿叶片愈伤组织不定芽分化的影响

6 讨论

全文总结

本文创新点

参考文献

附图

攻读硕士学位期间论文投稿与发表情况

致谢

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摘要

本研究以涩柿(Diospyros kaki Linn)品种南通小方柿(Diospyros kaki Linn.cv.Nantongxiaofangshi)为材料,以当年生枝条上的休眠芽为外植体较系统的研究建立了该品种的外植体初代、继代增殖培养、组培苗叶片愈伤组织的诱导和不定芽的分化等技术体系,以期为小方柿的生理生化及遗传转化方面的研究等奠定技术基础,同时也为我国唯一的矮生型柿品种—南通小方柿的快速繁育和生产推广提供了技术途径。主要研究结果如下:
  1.使用10%的双氧水对南通小方柿一年生枝条上的休眠芽消毒10 min、20 min的成活率分别是68%和80%,外植体无褐化现象,成活率高。消毒时双氧水分解产生的活性氧对小方柿休眠芽的萌发、生长有促进作用,同时还有效解决了休眠芽初代褐化死亡的问题。
  通过(1/2N) MS、MS、(1/2) MS三种基本培养基的比较研究发现,改良的(1/2N)MS培养基中的平均株高为15.9mm,适于南通小方柿组培苗的初代增殖培养。通过正交实验,萌动生长的休眠芽在0.05 mg/LNAA+(1/2N) MS+1.0 mg/LZT的培养基中苗生长较好、叶片大翠绿、基部愈伤小更适合初代休眠芽的培养。
  2.组培苗继代培养4-5代后用(1/2N) MS+ZT1.0 mg/L+ AA0.05 mg/L+GA30.05mg/L+PVP500 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L和(1/2N) MS+ZT1.0 mg/L+IAA0.05mg/L+PVP500 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L培养基交替培养,增殖系数达到6.5,并有效解决南通小方柿不能增殖扩繁的问题。研究了不同浓度的ZT、BA、TDZ对南通小方柿的生长发育、株高、增殖系数的影响。发现浓度为1mg/L ZT的培养基中生长的组培苗平均腋芽数最多,显著高于其他各处理,适合小方柿的继代增殖培养。比较培养基中分别添加不同浓度的IAA、IBA、NAA对小方柿组培苗的生长发育、株高、增殖系数的影响,结果表明:低浓度的细胞生长素尤其是0.05mg/L的IAA和IBA可促进南通小方柿组培苗的伸长生长和腋芽萌发,腋芽数均在3.0个以上有利于腋芽扩繁增殖。
  3.采用L9(34)正交试验设计,对影响叶片再生分化的基本培养基、TDZ、NAA以及暗培养天数进行选择优化,由正交实验分析得到最佳处理组合为:3mg/LTDZ+0.2mg/LNAA+(1/2N) MS培养基+1000 mg/L PVP+暗培养14天,30天后转入MS(1/2)+ZT2.0 mg/L+IAA0.1 mg/L培养基中诱导不定芽生长,该培养基处理后愈伤组织形成率达到82.52%,平均不定芽数0.92个,分化率56.31%,适合南通小方柿叶片愈伤组织的诱导和不定芽的再生。
  培养基中分别添加不同浓度的NAA、IBA、IAA、2,4-D和TDZ,比较了不同种类激素对小方柿叶片分化的愈伤率、不定芽数及分化率的影响。NAA对叶片愈伤组织的形成分化效果好于其他激素,0.2mg/L的NAA诱导出的不定芽数在整个处理中最多为0.57个,分化率36.07%,显著高于其他处理的平均不定芽数和分化率。

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