嗜水气单胞菌诱导的中华鳖cDNA文库构建及CCL20分析和表达研究

声明

摘要

第一章 文献综述

1 引言

2 中华鳖养殖现状

3 中华鳖病原研究现状

3．1 传染性病

3．2 非传染性病

3．3 诊断

3．4 预防

4 爬行动物免疫的研究进展

4．1 爬行动物的免疫器官

4．2 爬行动物的天然免疫

4．3 爬行动物的获得性免疫

4．4 影响爬行动物免疫应答的因素

5 嗜水气单胞菌

6 CCL20研究进展

6．1 CCL20的由来

6．2 趋化因子的分类和CCL20的结构

6．3 CCL20的功能

6．4 展望

7 技术路线

7．1 嗜水气单胞菌诱导的中华鳖cDNA文库构建

7．2 CCL20的部分序列克隆和验证

7．3 CCL20 mRNA组织表达分析(A)和应激实验(B)

8 研究目的和意义

第二章 温度对中华鳖胚胎发育和初生幼体形态特征及活动能力的影响

1 材料

2 实验方法

2．1 孵化

2．2 指标测定

2．3 数据处理

3 结果与分析

3．1 温度对胚胎发育和孵化成活率的影响

3．2 孵化温度对孵出稚鳖形态特征的影响

3．3 温度对新生幼体运动表现的影响

4 讨论

4．1 孵化温度对鳖卵孵化率的影响

4．2 温度对新生体大小及运动能力的影响

第三章 嗜水气单胞菌诱导的中华鳖SMART cDNA文库构建及相关基因的鉴定

1 材料

2 实验方法

2．1 细菌复壮及人工感染

2．2 总RNA的提取

2．3 单、双链cDNA的合成

2．4 cDNA的连接

2．5 连接产物电转化

2．6 cDNA文库的容量和重组率测定

2．7 DNA测序和序列分析

3 结果与分析

3．1 中华鳖总RNA的质量鉴定

3．2 cDNA的合成

3．3 cDNA文库的库容及重组率

3．4 插入片段长度分析

3．5 测序结果分析

4 讨论

第四章 中华鳖CCL20序列的特征分析

1 材料与试剂

1．1 实验材料

1．2 试剂

2 实验方法

2．1 cDNA的ORF区序列验证

2．2 cDNA的ORF区序列分析

3 结果与分析

3．1 CCL20的cDNA的ORF区序列分析

3．2 CCL20结构分析

4 讨论

第五章 中华鳖CCL20基因组织表达分析

1 材料与试剂

1．1 材料

1．2 主要试剂

2 实验方法

2．1 RNA提取及cDNA的合成

2．2 CCL20基因组织表达分析

2．3 CCL20基因在嗜水气单胞菌刺激下的表达特征分析

2．4 统计学分析

3 结果

3．1 目的基因和内参基因的扩增曲线

3．2 目的基因和内参基因的溶解曲线

3．3 正常组中华鳖CCL20基因组织表达特征

3．4 嗜水气单胞菌刺激组中华鳖CCL20基因组织表达特征

4 讨论

全文总结

参考文献

致谢

学术论文发表情况