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【6h】

三丁基锡(TBT)对奥利亚罗非鱼精巢细胞凋亡影响的研究

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三丁基锡(TBT)是有机锡化合物中的重要种类,在所有的有机锡种类中,毒性最大,应用最广,也是迄今为止大量进入海水环境的最毒的化学品之一。其主要的应用是船舶防污涂料,农用杀虫剂和PVC稳定剂等。广泛的应用范围使得其进入水环境的可能性非常大,已有学者(杨瑞强,2006)在太湖梅梁湾和东太湖水域的鱼体中检测到了比较高的三丁基锡残留,并在多个水域的水体里面检测到了相当水平的三丁基锡的存在。这就提示我们要对三丁基锡的毒性特征具有足够的了解,对其对水生生物资源、水产品安全以及对人的生命安全的危险具有清醒的认识。目前已有研究表明三丁基锡(TBT)具备的毒性特征有可以使水生软体动物发生性畸变；可以对水生软体动物和鱼类基因组DNA造成损伤；也可以对水生软体动物和鱼类机体抗氧化防御系统造成伤害；甚至会使得一些哺乳动物的一些细胞类型发生凋亡等。在这些细胞类型中对生殖细胞凋亡、尤其是对重要水生生物资源的细胞凋亡研究还未见报道。
　　 本试验以奥利亚罗非鱼为研究对象,在注射染毒和接触染毒两种染毒方式下,分别采用原位末端标记法(TUNEL)检测研究了三丁基锡(TBT)对鱼类精巢细胞凋亡的影响；采用试剂盒法对鱼类肝脏和精巢抗氧化防御系统的影响,以及对精巢细胞Ca2+-ATP酶活性的影响。试验结果表明,TBT可以引起雄性奥利亚罗非鱼精巢细胞凋亡,在注射剂量分别为0,1、3、5、10μg.kg-1体重范围内,染毒时间为24h和48h时,细胞凋亡率先升高后降低,在5μg.kg-1体重时达到最高,在0～5μg.kg-1体重范围内具有较好的剂量效应关系。染毒时间为96h时,细胞凋亡率先降低后升高,在5μg.kg-1体重时达最低。在相同的染毒时间下,细胞凋亡率随着注射剂量的增加先升高后降低。在接触染毒的情况下,在相同染毒时间的情况下,在试验浓度范围内(0、1、3、5、10μg.L-1),随着染毒浓度的升高奥利亚罗非鱼精巢细胞凋亡率逐渐升高。且具有较好的剂量效应关系。在注射染毒和接触染毒条件下,在相同的试验剂量/浓度范围内,在相同的染毒时间内,奥利亚罗非鱼精巢细胞Ca2+-ATP酶活性均随着注射剂量的升高而升高。在相同的注射剂量下,随着染毒时间的增加,Ca2+-ATP酶活性逐渐降低。注射染毒TBT条件下,奥利亚罗非鱼精巢细胞凋亡凋亡率与精巢细胞Ca2+-ATP酶活性在24h和48h具有协同性,在染毒时间为96h时,在0～5μg.kg-1体重时协同,然后相背离。可能表明,奥利亚罗非鱼精巢细胞精巢细胞凋亡与Ca2+-ATP酶活性的变化有的关系,Ca2+-ATP酶活性升高,细胞凋亡率增加,这可能与细胞凋亡过程中伴随的胞浆内Ca2+浓度升高有关。在96h表现的两者相背离的情况可能是因为在高剂量长时间的TBT刺激下,Ca2+-ATP酶活性进一步升高,Ca2+浓度进一步升高,但此时,执行细胞凋亡的相关基因或蛋白已经破坏,机体无法启动凋亡清除机制,细胞凋亡率反而下降。另外,TBT可以对机体的抗氧化防御系统产生作用。由于已有研究表明抗氧化防御系统与细胞凋亡之间存在着一定的的关系。为了更好的解释一些试验现象,课题组研究了在注射染毒条件下,奥利亚罗非鱼肝脏和精巢SOD活性和GSH含量的变化。结果表明,TBT可以引起奥利亚罗非鱼肝脏和精巢中SOD活性升高和GSH含量上升。本试验条件下,其动态变化规律均为在时间一定的情况下先升高后降低；在注射剂量一定的情况下,先升高后降低。
　　 由此,可以得出结论:TBT可以诱导奥利亚罗非鱼精巢细胞凋亡,凋亡的发生与细胞Ca2+-ATP酶活性的变化有关,与机体抗氧化防御系统的启动和破坏有关。

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