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秤锤树组织培养及其内生菌的分离鉴定

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缩略语表

第一章 文献综述

1 秤锤树的的研究进展

2 木本植物组织培养中不定芽诱导的研究进展

3 植物内生真菌的研究概况及分子生物学在内生菌研究中的作用

4 研究目的和意义

5 技术路线图

第二章 不同激素种类和配比对秤锤树愈伤组织诱导的影响及植株再生

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

1.3 不定芽的诱导

2 结果与分析

2.1 添加不同浓度的2,4-D对秤锤树叶片愈伤组织诱导影响

2.2 添加不同浓度的2,4-D和KT对秤锤树叶片愈伤组织诱导影响

2.3 添加不同浓度的6-BA和NAA对秤锤树叶片愈伤组织诱导影响

2.4 添加不同浓度的TDZ和NAA对秤锤树叶片愈伤组织诱导影响

2.5 添加不同浓度的BA、NAA、IBA、KT和TDZ对秤锤树叶片生根及愈伤组织诱导的影响

2.6 组培苗叶柄为外植体直接诱导不定芽,茎作为外植体间接诱导不定芽及生根

3 讨论

第三章 秤锤树愈伤组织的生理生化特征

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2 结果与分析

2.1 愈伤组织中可溶性蛋白含量的变化

2.2 不同激素组合处理下MDA含量的变化

2.3 不同激素组合处理下SOD含量的变化

2.4 不同激素组合处理下POD含量的变化

2.5 不同激素组合处理下PPO含量的变化

3 讨论

第四章 南京自然繁育秤锤树叶片内生菌的分离、鉴定以及对植株生长的影响

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2 结果与分析

2.1 内生菌的菌落形态

2.2 内生菌的分子鉴定

2.3 内生菌的分子鉴定rDNA-ITS测序结果

2.4 菌株rDNA-ITS序列比对结果

2.5 秤锤树无菌苗的获得

2.6 内生菌对秤锤树生长的影响

3 讨论

参考文献

结论

致谢

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摘要

本研究分别从植物组织培养、愈伤组织的生理生化特征以及内生菌和植物的相互关系等方面入手,为探索秤锤树快速繁殖提供有益的线索。以秤锤树幼嫩叶片作为外植体,添加不同种类不同浓度配比的植物生长调剂,诱导获得不同形态、不同质地的愈伤组织。对获得的愈伤组织做酶活性分析,分析添加不同激素作用下,抗氧化酶酶活性的变化。从室外取样叶片中分离秤锤树内生菌株,通过无菌苗回接实验,研究秤锤树与其内生菌之间的相互关系。研究结果如下:
   秤锤树叶片愈伤组织的诱导:在供试条件下,不同的激素组合都能诱导出愈伤组织,愈伤组织的质量及出愈率和出愈时间都同植物生长调节剂的种类和浓度密切相关。在培养基中添加不同浓度的2,4-D,与0.25-2mg/L的KT组分时,能够获得致密、团块状且生长快速的愈伤组织。而6-BA和NAA组合诱导获得的愈伤组织虽然生长比较慢,但获得的愈伤颜色呈白色,较为干燥,近球形,致密,颗粒比较小,而且愈伤组织上有不定根的发生,在愈伤组织形态上与由2,4-D作用的差别很大。在以另一株幼龄秤锤树作为研究材料时发现:添加低浓度的生长素诱导不定根的发生,高浓度的生长素诱导愈伤组织的形成。
   室内无菌苗的扩繁与生根:无菌苗扩繁其适宜的培养基为WPM+6-BA(1.0mg/L)+NAA(1.0mg/L),无菌苗生根其适宜的培养基为WPM+6-BA(0.05mg/L)+NAA(2.0mg/L)+AC(0.05%),生根率80%。
   在不同浓度2,4-D和KT组合下,随着2,4-D浓度的提高,SOD活性逐渐降低,而POD活性却相差不大,PPO活性呈先升高后降低的趋势,MDA含量呈逐渐升高的趋势。PPO活性和可溶性蛋白含量呈反相关,MDA含量同SOD活性也呈反相关。
   从秤锤树室外叶片中共分离获得11株菌株,7株为真菌,4株为细菌,对其中的6株真菌菌株做ITS测序,在NCBI网上进行比对,有5株菌株为球毛壳菌(Chaetomiumglobosum),另一株为子囊菌(ascomycete)。回接秤锤树组培苗实验表明:分离的11株菌株对组培苗的株高生长影响不大,可初步鉴定其为内生菌,其中的属于球毛壳菌的F和H菌株对无菌苗的生长有促进作用。

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