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孤儿调控因子CovR调控高致病性2型猪链球菌毒力的实验研究

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文摘

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声明

第一部分研究性论文

前言

第一章covR突变株的构建和鉴定

第一节利用生物信息学方法鉴定05ZYH33中的covR基因

第二节covR突变株的构建和鉴定

第三节讨论

第二章covR的敲除对S.suis 05ZYH33表型的影响

第一节生长速率的变化和光镜下的形态改变

第二节溶血活性测定

第三节讨论

第三章covR的敲除对细菌毒力的改变对细胞的影响

第一节△covR对上皮细胞和血管内皮细胞的黏附增强

第二节△covR抵抗中性粒细胞和单核细胞杀伤的能力增强

第三节讨论

第四章covR的敲除对细菌毒力的改变对宿主的影响

第一节利用仔猪感染模型发现△covR的毒力提高

第二节病理学特征分析

第三节讨论

第五章比较组学分析野生株与突变株表达的变化

第一节利用基因芯片技术鉴定受CovR调控的基因

第二节使用RT-PCR技术对部分基因芯片结果进行验证

第四节讨论

参考文献

第二部分综述

一猪链球菌致病机制研究进展

二2型猪链球菌二元信号转导系统研究进展

全文小结

附录

攻读学位期间发表的论文

致谢

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摘要

2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)是一种重要的人畜共患传染病原体。S.suis2感染的发病机制仍不清楚。本研究在前期完成对1998年江苏流行的强毒株98HAH12和2005年四川流行的强毒株05ZYH33的全基因组测序及功能注释的基础上,通过生物信息学比较分析,在05ZYH33的全基因组序列中,发现了化脓链球菌CovR同源的序列;采用基因敲除技术构建了反应调节因子CovR基因敲除突变株ΔcovR;生物学特性研究显示,与野毒株相比,ΔcovR的表型发生明显的变化,如细菌的链状结构变长、荚膜增厚、溶血活性增强等;体外细胞实验表明,与野毒株相比,ΔcovR对上皮细胞(Hep2)和内皮细胞(HUVEC)的黏附能力明显增强;ΔcovR抵抗中性粒细胞(PMN)和单核细胞(MONO)吞噬和杀伤的能力也明显增强;仔猪动物感染实验表明,与野毒株相比,ΔcovR对仔猪的致病性增强。病理学观察发现两组动物的肾脏和心脏都发生了明显的病理学变化,以ΔcovR组的更为严重;采用基因芯片对05ZYH33和ΔcovR的转录谱进行比较分析发现CovR失活导致了占基因组8.9%的共195个基因在转录水平发生明显的变化,其中,193个基因表达上调,2个基因表达下调。在国际上首次报道CovR对S.suis毒力的调控作用研究。

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